论文摘要
目的:1.用体外化学和生化氧化体系初步研究大豆甙元（Da）、辅酶Q10（CoQ10,CQ）、番茄红素（Lyc）和叶黄素（Lut）的体外抗氧化效果和抗氧化剂之间的协同效果,探讨它们的抗氧化机制以及协同作用机制。2.利用动物实验模型,研究大豆甙元和辅酶Q10分别单独补充以及它们分别与混合类胡萝卜素（番茄红素和叶黄素,LL）和/或微量元素（锌和硒,ZS）联合补充对大鼠体内抗氧化水平的影响。方法:1.各抗氧化剂的体外抗氧化活性测定各种抗氧化剂的Fe（Ⅲ）还原能力、Fe（Ⅱ）和Cu（Ⅱ）螯合能力以及对DPPH和超氧阴离子自由基的清除活性。评价了不同抗氧化剂对Fe（Ⅱ）—抗坏血酸诱导的肝微粒体脂质过氧化和对Cu（Ⅱ）诱导的LDL氧化的抑制能力。2.各抗氧化剂在体外体系的抗氧化协同效果评价各抗氧化剂分别与VE在微粒体膜脂质过氧化体系中的协同效果,同时还分别测定Da/CQ与Lyc和Lut的两两协同效果。此外,评价了各抗氧化剂分别与VC在Cu（Ⅱ）诱导的LDL氧化体系中的协同效果。3.大豆甙元单独补充以及与微量营养素联合补充对大鼠体内抗氧化状态的影响用含相对较高脂肪的饲料喂养大鼠,将大鼠分为9组:对照、D（H）（高纯度Da）、D（H）+ZS、D（H）+LL、D（H）+ZS+LL、D（L）（低纯度Da）、D（L）+ZS、D（L）+LL、D（L）+ZS+LL。其中Da、Lyc、Lut、Zn和Se的剂量分别为5 mg/kg bw·d、2 mg/kg bw·d、1 mg/kg bw·d、1 mg/kg bw·d、4μg/（kg bw·d）。评价两种不同纯度（80%和40%）的大豆甙元单独补充以及与微量营养素联合补充后对大鼠血浆和组织抗氧化酶（SOD、GSH-px、CAT）活性和脂质过氧化水平（MDA）、淋巴细胞DNA氧化损伤水平、血浆NO含量、血脂水平、骨指标的影响。4.辅酶Q10单独补充以及与微量营养素联合补充对大鼠体内抗氧化状态的影响用上述动物模型,大鼠分为6组:对照、CQ、CQ+ZS、CQ+LL、CQ+ZS+LL和VE组,CQ和VE的剂量分别为10和2 mg/kg bw·d,其他营养素剂量同前。比较辅酶Q10单独补充以及它们分别与类胡萝卜素和/或微量元素联合补充对大鼠的各项抗氧化指标的影响。结果:1.各抗氧化剂的体外抗氧化活性以及不同抗氧化剂在体外体系中的抗氧化协同效果（1）Da还原能力、螯合能力和清除DPPH自由基活性都很低,不过具有较强的清除O2-活性。Da抑制Fe（Ⅱ）-VC诱导的微粒体脂质过氧化的能力较弱,但是却有较强的抑制Cu（Ⅱ）诱导的LDL氧化的能力。（2）CQ没有还原能力、螯合能力和自由基清除活性。它在微粒体体系中具有较强的抗氧化活性,一定浓度范围的CQ在LDL中也表现出弱抗氧化活性。（3）Lyc具有较强的还原能力和强自由基清除活性。Lyc在微粒体脂质过氧化体系中表现出很强的抑制活性,但在LDL体系中不具备抗氧化能力。（4）Lut具有较强的还原能力、弱的螯合能力,但它的自由基清除活性很低。Lut对微粒体脂质过氧化和LDL氧化的抑制活性都较低。（5）在微粒体脂质过氧化体系中,各种抗氧化剂都能和VE协同抑制脂质过氧化（P=0.000）,特别是Lyc+VE和CQ+VE的协同效果更明显。Da、Lyc和Lut三者中两两之间都具有协同增效效果（P＜0.01）,CQ、Lyc和Lut三者中两两之间也都有协同效果（P=0.000）。（6）Da、CQ和Lut都能与VC协同延迟Cu（Ⅱ）诱导的LDL氧化（P＜0.05）。2.大豆甙元单独补充以及与微量营养素联合补充对大鼠体内抗氧化状态的影响（1）单独补充高纯度的大豆甙元能显著提高血浆SOD和TAOC水平以及肝GSH-px活性,显著降低淋巴细胞DNA损伤水平（P＜0.05）;单独补充低纯度的大豆甙元能显著提高血浆SOD、TAOC及肝SOD、CAT水平（P＜0.05）。（2）大豆甙元和微量营养素联合补充能进一步提高大鼠血浆和肝抗氧化酶活性,降低脂质过氧化和淋巴细胞DNA氧化损伤水平。随着所添加的抗氧化剂种类的增加,抗氧化效果也呈上升趋势。并且,大豆甙元和混合类胡萝卜素联合补充对大鼠抗氧化状态的影响趋于优于它和微量元素联合补充。（3）大豆甙元单独补充及与微量营养素联合补充都能显著提高大鼠血浆NO浓度（P＜0.05）,但各补充组之间没有显著差异。（4）与对照组相比,大豆甙元单独补充及与微量营养素联合补充对大鼠血脂水平和骨健康相关指标没有明显影响。（5）对于所有大鼠抗氧化指标,对应的两种纯度的大豆甙元补充组之间的没有显著差异。3.辅酶Q10单独补充以及与微量营养素联合补充对大鼠体内抗氧化状态的影响单独补充CQ对大鼠淋巴细胞DNA自发性氧化损伤没有显著影响。但是,单独补充组血浆SOD、TAOC及肝SOD水平显著高于对照组（P＜0.05）。与其他物质联合补充能更进一步提高大鼠血浆和肝匀浆抗氧化酶活性,降低脂质过氧化,联合补充还能显著降低淋巴细胞DNA氧化损伤水平（P＜0.05）。CQ单独补充及与微量营养素联合补充对血脂水平、血浆NO浓度都没有显著影响。结论:1.大豆甙元抑制Fe（Ⅱ）-VC诱导的微粒体脂质过氧化的能力低,但是却有较强的抑制Cu（Ⅱ）诱导的LDL氧化的能力,其机制可能与Da和LDL表面的Apo B的特异相互作用有关。2.氧化态CQ不是直接的抗氧化剂,但微粒体中存在CQ还原系统,将它还原成还原态的CQ并发挥较强的抗氧化活性。LDL还原CQ的能力较低。3.Lyc是强自由基清除剂,在微粒体脂质过氧化体系中表现出很强的抑制活性,但在本研究的LDL体系中不具备抗氧化能力。叶黄素自由基清除活性、抑制微粒体脂质过氧化和LDL氧化的能力都较低。4.不同抗氧化剂在体外氧化体系中有协同增效效果,可能和不同抗氧化剂能互相再生、抗氧化剂在体系中定位不同、抗氧化机制互补等因素有关。5.在本研究所选的动物模型中,大豆甙元和辅酶Q10单独补充只能在较低程度上能提高大鼠血浆和组织抗氧化状态。当它们与微量营养素联合补充时,抗氧化效果增强,特别是与混合类胡萝卜素联合补充或与混合类胡萝卜素及微量元素联合补充的效果更强。大豆甙元的纯度对它的抗氧化活性没有显著影响。6.植物雌激素大豆甙元能提高大鼠血浆NO浓度。以上研究结果提示,大豆甙元或辅酶Q10与营养素联合补充可能会更好地改善人群健康。