论文摘要
第一部分体外细胞因子联合诱导人外周血单核细胞分化为肝样细胞的实验研究目的：探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor, HGF）和成纤维细胞生长因子-4（fibroblast growth factor-4, FGF-4）体外联合诱导人外周血单核细胞向肝样细胞分化的能力及分化后的细胞是否具有肝样细胞的典型形态和生化特征。方法：密度梯度离心法和细胞贴壁筛选法从外周血中分离并初步纯化所获取的单核细胞用于培养,诱导。实验分别设立A,B两组。A组为阴性对照组,在细胞培养过程中不添加细胞分化诱导因子HGF和FGF-4; B组应用HGF和FGF-4体外联合诱导人外周血单核细胞向肝样细胞分化。在不同分化阶段观察细胞形态特征的变化及采用免疫荧光细胞化学染色法检测细胞甲胎蛋白（alpha fetoprotein, AFP）和细胞角蛋白19（cytokeratin19, CK19）表达的情况结果：A组细胞随培养时间延长由刚分离出的单核细胞呈较均一的圆形逐渐变得不规则,呈条索状,纤维样改变,少部分细胞呈圆形,细胞发生凋亡,裂解；B组细胞随诱导分化培养时间延长,细胞变大,变圆,呈集落生长,增殖活性强。于诱导2周后具有典型肝样细胞形态。免疫荧光细胞化学染色法检测A组细胞AFP和CK19表达呈阴性,而B组有AFP和CK19阳性表达,于诱导2周后AFP和CK19阳性表达最为明显结论：在HGF和FGF-4体外联合诱导条件下,人外周血单核细胞具有向肝样细胞分化的潜能及分化后的细胞具有肝样细胞的典型形态和生化特征。第二部分PKH26标记单核细胞分化的肝样细胞裸鼠体内示踪的实验研究目的：探讨PKH26标记单核细胞衍生的肝样细胞移植受体鼠肝组织过程中的有效示踪剂,并进一步观察移植后的肝样细胞存活,分布与转归情况。方法：以红色荧光染料PKH26标记单核细胞衍生的肝样细胞,尾静脉注入受体鼠体内作为实验组。对照组注射等量生理盐水,分别于移植2周后取肝组织,通过荧光显微镜观察实验组肝样细胞向肝脏迁移与转归的情况。采用免疫荧光细胞化学染色法检测移植的肝样细胞白蛋白（albumin, ALB）的表达。结果：动物实验组受体鼠肝组织冰冻切片中可见大量PKH26标记阳性的肝样细胞,这些细胞主要分布在肝索区,并在肝索区的肝细胞间发生整合,于移植2周后行免疫荧光细胞化学染色法检测实验组肝样细胞ALB表达阳性。动物实验对照组受体鼠肝组织冰冻切片中未发现PKH26标记阳性的肝样细胞。结论：PKH26可作为肝样细胞移植的一种有效示踪剂。移居肝组织的肝样细胞由肝窦区向肝索区迁移,并在肝索区的肝细胞间发生植入,整合,并分化为成熟肝细胞,表达白蛋白。
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