麻黄附子细辛汤过敏性鼻炎药效学及效应成份分析的研究

论文摘要

研究背景变应性鼻炎（allergic rhinitis, AR）又称过敏性鼻炎,是一种常见的变态反应性疾病,属中医学“鼻鼽”范畴,发病率有全球性逐年增加的趋势,特别是欧美、日本等发达地区,平均发病率在10%～25%左右。变应性鼻炎本身虽不是严重疾病,但可影响患者的生活质量、增加经济负担,并可诱发或并发支气管哮喘、鼻窦炎、鼻息肉、中耳炎和变应性结膜炎等疾病,已成为一个亟待解决的全球性健康问题。在治疗变应性鼻炎方面,现代医学不能彻底改变变态反应体质,且有一定的副作用。虽然目前一些新开发的西药已能降低副作用,但价格昂贵。中药在变应性鼻炎急性期控制症状的方面有潜在的不同于西药的多靶点机制,而且没有脱敏治疗而引起的过敏性休克、服用抗组胺类药后的嗜睡反应,可以提高生活质量。日本应用汉方治疗变应性鼻炎有着丰富的经验,临床报道和实验研究较多,机制研究也较深入,其中麻黄附子细辛汤是常用方剂之一,国内亦有临床报道和部分研究,但仍不够系统,也尚无成药,服用不便。研究目的研究麻黄附子细辛汤对过敏性鼻炎的作用；研究麻黄附子细辛汤的急性毒性剂量；初步研究本方剂的功效物质,建立相应的定量分析方法,为制剂工艺研究提供指导。实验方法及结果1、采用卵清蛋白建立过敏性鼻炎豚鼠模型,随机分为4组（n=8）：模型组、辛芩颗粒对照组（4.65 g·kg-1）、小青龙汤组（7.44 g·kg-1）、麻黄附子细辛汤（2.33g·kg-1）,另设正常对照组。3个药物治疗组每天ig给药1次,给药共14d,以治疗前后的行为学体征积分、血液组胺值和鼻黏膜切片病理变化为观测指标。结果麻黄附子细辛汤组、小青龙汤组和辛芩颗粒组治疗后体征积分和血液组胺含量均有降低,与正常组相比差异有统计学意义（P<0.001）。麻黄附子细辛汤组的血液组胺含量（3.64±0.83）mg.L-1与小青龙汤组（4.58±0.51）mg·L-1、辛芩颗粒组（4.36±0.13）mg·L-1差异都有统计学意义（P1<0.001,P2=0.001）,其对鼻黏膜炎症的修复略优于小青龙汤和辛芩颗粒。2、麻黄附子细辛汤小鼠进行急性毒性实验（n=10）,LD50为122.974 g·kg-1（95%可信区间为106.331-143.954 g·kg-1）,相当于人临床剂量的33倍,该汤剂具有较高的安全性。3、麻黄附子细辛汤中麻黄碱和伪麻黄碱HPLC含量测定法的建立：Angilent1100液相色谱仪,色谱柱为Alltima Phenyl苯基柱（250 mmn×4.6 mm,51μm）；流动相A：甲醇,流动相B：含0.04%三乙胺、0.02%二正丁胺,用磷酸调至pH=3.50,A：B=1.5：98.5,流速0.6ml·min-1;柱温25℃；波长210nm；进样量101μL。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱保留时间分别为：t1=6.701min,t2=7.392min。塔板数按盐酸麻黄碱计,大于3000,分离良好。盐酸麻黄碱在20.16～221.76μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为A=20.134C-17.924（r=0.9999,P<0.001,n=6）,盐酸伪麻黄碱在10.08～110.88μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为A=25.182C-22.793（r=0.9999,P<0.001,n=6）。测得临床一个处方量的麻黄附子细辛汤中平均煎出麻黄碱33.83mg,伪麻黄碱15.36mg,平均浸膏得率为12.14%；6克麻黄制成的供试液中平均含麻黄碱68.48mg,伪麻黄碱38.52mg。则临床煎法的麻黄碱转移率为49.40%,伪麻黄碱转移率为39.88%。4、麻黄附子细辛汤中甲基丁香酚的GC-MS含量测定方法的建立：气相色谱与质谱联用仪（HP6890GC/5973MS）,DB-5MS毛细管色谱柱（30m×0.25mm,0.25μm）；汽化温度250℃；程序升温：起始温度80℃,持续1min,以5℃·min-1的速率升温至150℃,持续1min,以200℃·min-1的速率升温至270℃,持续1min；载气为氦气,氦气流速1 mL·min-1;汽化温度为250℃,不分流,进样量1μL。EI源电子能量70 eV；电子倍增器电压1847V；选择离子检测质荷比（m/z）为178的离子。结果甲基丁香酚的保留时间为14.526min,分离良好,在27.625-442.0μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,其回归方程为：A=89495C+59346（r=0.9998,P<0.001,n=6）。测得临床一个处方量的麻黄附子细辛汤中挥发油提取物平均含甲基丁香酚32.023μg。5、麻黄附子细辛汤中乌头总碱的含量测定参照药典中附子药材乌头总生物碱滴定法,用乙醚-三氯甲烷（3：1）混合溶液多次提取后,以硫酸滴定液和氢氧化钠滴定液滴定,计算临床一个处方量的麻黄附子细辛汤中煎出乌头总生物碱163.701mg,转移率为72.03%。6、麻黄附子细辛汤煎煮工艺的研究：通过正交试验设计,以浸膏得率与E和PE转移率所得分数为综合评价指标,对麻黄附子细辛汤煎煮工艺进行研究,优选出最佳工艺为加水12倍量、煎煮3次、每次1.5h,其得率为25.20%,E和PE转移率为77.44%。结论麻黄附子细辛汤能改善过敏性鼻炎豚鼠症状,对血液组胺的降低优于小青龙汤和辛芩颗粒,对鼻黏膜的修复优于小青龙汤。该方剂安全性较好,适合进一步的研究开发。本课题所建立的HPLC测定麻黄药材和麻黄附子细辛汤中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱含量的方法和GC-MS测定麻黄附子细辛汤中甲基丁香酚含量的方法均快速简便、重现性良好,可用于麻黄附子细辛汤剂中相应物质的含量测定。工艺考察选用麻黄碱和伪麻黄碱总的转移率、浸膏得率进行综合评价,最佳工艺为加水12倍量、煎煮3次、每次1.5h,煎出物含量与临床煎法有差异,制剂时需考虑。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 一、疾病概况
• 二、治疗药物
• 三、机制研究
• 参考文献
• 第二章 麻黄附子细辛汤对过敏性鼻炎豚鼠作用的研究和小鼠急性毒性试验
• 第一节 麻黄附子细辛汤和小青龙汤对过敏性鼻炎豚鼠作用的研究
• 1、材料
• 2、方法
• 3、结果
• 第二节 麻黄附子细辛汤的小鼠急性毒性试验
• 1、材料
• 2、方法
• 3、结果
• 本章小结与讨论
• 参考文献
• 第三章 麻黄附子细辛汤功效成分含量测定方法的研究
• 第一节 麻黄附子细辛汤中麻黄碱和伪麻黄碱HPLC含量测定方法的建立
• 第二节 麻黄附子细辛汤中甲基丁香酚GC-MS含量测定方法的建立
• 第三节 麻黄附子细辛汤中乌头总碱的含量测定
• 本章小结与讨论
• 参考文献
• 第四章 麻黄附子细辛汤水提取工艺研究
• 1、仪器与试药
• 2、正交实验方法与结果
• 3、工艺验证
• 本章小结与讨论
• 全文小结
• 攻读硕士学位期间发表论文
• 附录 符号与缩写
• 致谢
• 统计合格证明