重组人HER2/neu ICD的制备及抗肿瘤效应研究

论文摘要

本研究利用基因重组技术构建了人HER2/neu ICD真核表达载体pPICZα/HER2/neu ICO,电转化毕赤酵母X-33后,筛选出稳定高效的分泌表达HER2/neu ICD的工程菌株。经SDS-PAGE、Western blot和离子交换层析纯化证明HER2/neu ICD与天然HER2/neu ICD有相同的理化性质。进而在80L发酵罐水平,进行了HER2/neu ICD表达条件的优化,建立了一种适合于大规模发酵和纯化HER2/neu ICD的方法。将HSP110与HER2/neu ICD结合成复合物,用HSP110-HER2/neu ICD复合物,HSP110-P789-797,HER2/neu ICD分别免疫小鼠,进行诱导特异性CTL的实验研究。结果表明:HSP110-HER2/neu ICD复合物比HSP110-P789-797,HER2/neu ICD更有效地促进T淋巴细胞分泌IFN-γ,诱导CTL特异性杀伤HER2/neu高表达的肿瘤细胞;对HER2/neu高表达的乳腺癌模型小鼠的治疗作用也明显优于HSP110-P789-797和HER2/neu ICD。本实验构建的重组HER2/neu ICD与HSP110结合的复合物是一种有潜力的肿瘤疫苗。本实验的创新之处在于:①首次在毕赤酵母中高效表达了HER2/neu ICD;②在80L发酵罐水平,建立了发酵和纯化HER2/neu ICD的方法;③证实将HER2/neuICD与HSP110形成复合物,可诱发机体强大的特异性免疫反应,用于HER2/neu高表达的肿瘤的免疫治疗。

论文目录

• 提要
• 英文缩略词
• 前言
• 第一章 文献回顾
• 第一节 HER2/neu基因的发现
• 第二节 HER2/neu治疗靶点的抗肿瘤药物研究现状
• 第三节HER2/neu作为免疫制剂的制备
• 第四节HSP110-HER2/neu ICD肿瘤疫苗的设计
• 第二章 HER2/neuICD毕赤酵母高效分泌表达体系的建立和鉴定
• 第一节 材料和方法
• 第二节 实验结果
• 第三节 讨论
• 第三章 HER2/neuICD大规模发酵及纯化
• 第一节 材料和方法
• 第二节 实验结果
• 第三节 讨论
• 第四章 HSP110-HER2neu ICD复合物的抗肿瘤作用
• 789-797的合成、纯化与鉴定'>第一节 抗原肽P_789-797的合成、纯化与鉴定
• 789-797及HER2/neu ICD与HSP110的体外结合'>第二节 抗原肽P_789-797及HER2/neu ICD与HSP110的体外结合
• 第三节 HSP110-HER2/neu ICD复合物诱导特异性CTL的实验研究
• 第四节 HSP110-HER2/neu ICD复合物的抑瘤实验研究
• 第五节 实验结果
• 第六节 讨论
• 研究总结
• 参考文献
• 附录一 pPICZα/HER2/neu ICD构建过程
• 附录二 pPICZα/HER2/neu ICD序列分析结果
• 攻读博士期间发表的学术论文及其他成绩
• 摘要
• Abstract
• 致谢