组织工程构建新型腹壁修复材料的实验研究

论文摘要

目的:(1)探讨种植骨骼肌成肌细胞于Ⅰ型胶原/聚乳酸/乙醇酸支架,模拟力学环境和组织血供,构建三维立体、具备有序肌纤维和收缩潜力的组织工程骨骼肌的可行性;(2)探讨种植成纤维细胞于小肠粘膜下层,复加组织工程骨骼肌形成组织工程材料修复腹壁缺损的可行性;(3)探讨组织工程材料与生物材料修复实验动物腹壁缺损的疗效优劣、再生组织差异,探讨进一步改进构建方法的途径。方法:(1)制备种子细胞和支架材料:①使用酶消化、差速贴壁法从乳鼠骨骼肌标本中分离纯化成肌细胞培养;②使用酶消化从乳鼠皮肤中分离纯化成纤维细胞培养;③按Abraham法制备猪小肠粘膜下层;④利用细胞形态学、免疫组化鉴定鉴定所制备种子细胞,利用免疫组化检查制备的小肠粘膜下层。(2)构建组织工程材料,修复腹壁缺损:①成肌细胞接种于Ⅰ型胶原/PLGA混合凝胶,置于机械细胞刺激器中的力学环境,体外培养3周;②成纤维细胞接种于SIS,体外培养3周;③上述两者复合预构的网膜血管网,构建组织工程腹壁修复材料;④制备大鼠全层腹壁缺损,分别使用组织工程材料或生物材料(3层SIS)修复;⑤观察术后动物一般恢复情况,检查术后不同时期修复腹壁的电生理特性;⑥分批处死动物,测定术后不同时期两组修复后再生腹壁的腹壁厚度、抗张强度;⑦观察术后不同时期修复区中心腹壁的组织结构、细胞密度、细胞成分、血管化程度;确定组织工程材料修复后再生腹壁有否形态接近正常骨骼肌的肌肉层结构、新生肌纤维是否与宿主肌纤维融合、有否肌球蛋白重链表达;⑧统计分析。结果:(1)成功构建三维立体、肌纤维平行有序、具备收缩潜力的组织工程骨骼肌。(2)成纤维细胞种植于SIS,复加组织工程骨骼肌构建的组织工程材料治疗腹壁缺损疗效优于生物材料;修复后的腹壁细胞密度更高、厚度更大、机械强度更高;具有纤维组织层和肌肉层结构、表达肌球蛋白重链、存在肌电活动。生物材料在术后2月完全被纤维组织代替。表现在(3)术后3月,组织工程材料修复后腹壁厚度较2月时减少、肌电活动强度也减低。结论:(1)构建三维立体、具有类似正常骨骼肌形态和收缩潜力的组织工程骨骼肌是可行的。(2)组织工程材料修复腹壁缺损疗效优于生物材料,且能弥补生物材料修复后再生腹壁主要由纤维组织再生构成、腹壁较正常腹壁薄、机械强度低、组织再生速度缓慢、血管化程度低等不足,有较好的发展前景。(3)缺神经支配,组织工程材料在体内不能长久维持在最佳状态,需进一步改进构建方法。创新点:(1)经文献检索,本实验是国内外关于组织工程学技术应用于疝和腹壁外科的首次探索(附检索证明),为腹壁缺损修复的研究提供了新的思路。(2)国内首次构建组织工程骨骼肌组织。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写
• 前言
• 第一部分:种子细胞、支架材料的制备
• 1. 种子细胞
• 2. 支架材料SS（Abraham法 ）
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 主要参考文献
• 第二部分:构建组织工程材料,修复腹壁缺损
• 1. 构建组织工程材料
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 主要参考文献
• 结论和创新
• 附录
• 文献综述
• 发表论文
• 致谢