论文摘要
目的:通过对水-甘油通道蛋白包括AQP3、AQP7、AQP9的基因克隆、染色体定位、组织表达谱的研究,为这些基因的功能研究奠定基础。为了研究上游因子对AQP9调控,获得并分析了AQP9的启动子序列。方法:1.同源比较法,设计用于扩增特异基因的引物;2.RT-PCR技术,扩增特异基因的cDNA片段;3.5’和3’RACE技术,获取基因的5’和3’末端cDNA序列;4.对特异基因的扩增产物进行回收、测序;5.利用半定量RT-PCR技术,获得特异基因的组织表达谱;6.通过对基因组PCR获取特异基因的基因组序列;7.利用辐射杂交板技术,对特异基因进行染色体定位。结果1.获得5744bp的AQP3的DNA序列（Genbank accession no.EU024115）,包括57 bp5’非编码序列和873 bp CDS,编码区编码292个氨基酸,和人、小鼠、大鼠的相似性分别为94%,94%和93%。同时,它们的基因组序列结构也一致,整个基因组序列包括六个外显子,五个内含子,每个外显子和内含子的交界处序列符合GT/AG规律。RT-PCR检测表明AQP3大量表达于脾和胃,在肾和肺部有少量表达,在其它组织中没有发现AQP3的表达。2.获得了AQP7 1127 bp的mRNA序列（Genbank accession no.EU024116）,其中包括987 bp编码序列,这些编码序列对应328氨基酸,和人、小鼠、大鼠相似性分别是73%,68%和72%,还有包含polyA尾的77 bp 3’非编码区序列。AQP7在多个组织里都有表达,大量表达于脂肪,在肾和脑里也有表达,在脾、肾、肝、肠、胃、肌肉和心脏里也有少量表达。3.获得AQP9 1261 bp包含编码区的mRNA序列（Genbank accession no.EU 194551）,这个开放读码框编码包括888bp对应295氨基酸序列,与人、小鼠和大鼠相比,相似性为82%,75%和73%。AQP9大量表达与肝、脂肪和肺,在肾和脑里也有表达,在脾、肠、肌肉、和心脏里有少量表达。4.获得AQP9 2709 bp 5’端侧翼基因组序列（Genbank accession no.EU 1947552,2709bp）,发现了两个胰岛素负效应元件（negative insulin response elements,TGTTTTC andTATTTTG）、糖皮质激素效应元件（glucocorticoid-responsive elements）、转录因子CCAAT增强子结合蛋白（CCAAT enhancer binding protein,C/EBP）结合位点、肝细胞核因子（hepatocyte nuclear factor,HNF）和核转录因子（nuclear transcription factorkappa B,NF-kB）等结合位点。5.通过辐射杂交板技术发现AQP3和AQP7位于猪的第10号染色体长臂,AQP9位于猪第1号染色体长臂。结论:1.猪AQP3,7,9与其它物种来源的对应的基因有很高的同源性。2.猪AQP3,7,9的定位结果进一步证实了人和猪之间染色体的对应关系。3.猪AQP7的C—末端和N—末端氨基酸同源性很低造成各物种之间AQP7的同源性不高。4.AQP3,7,9分别大量表达于胃,脂肪,肝,暗示这几个基因在这些组织发挥重要的作用。