论文摘要
枸杞是茄科（Solanaceae）植物宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）的干燥成熟果实,是我国的一种传统中药,具有“补肾益精,养肝明目”的功效。枸杞多糖,作为枸杞的主要活性成分,对其研究多是集中在理化性质,结构阐述及其生物活性方面。枸杞多糖,特别是枸杞多糖LbGp4具有很强的免疫调节作用。多糖生物活性的发挥,主要依赖于其中的寡糖活性片段与细胞受体的相互识别,相互结合,免疫调节作用的发挥,是通过特定的受体介导的。本课题将对枸杞多糖LbGp4的降解及其可能存在的寡糖活性片段进行初步研究。1.枸杞糖复合物LbGp4的分离提取及其理化性质采用水提醇沉,然后用sevag法除蛋白后得到枸杞粗多糖LBP,然后经过阴离子交换柱DEAE-纤维素和凝胶排阻色谱柱Sephadex G-100分离纯化,得到枸杞多糖LbGp4。经高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）检测其为均一组分。苯酚-硫酸法测得其糖含量为86.73%,GC分析其单糖组成为Ara:Gal:Rha:Xyl=1:1.3:0.11:0.08。2.枸杞糖复合物LbGp4的降解由于LbGp4为糖蛋白,所以分别采用非特异性酶Pronase E和β-消除反应释放糖链,得到糖链LbGp4-OL和LbGp4-OL-β,经HPGPC检测其为均一组分,其糖组成为Rha,Ara和Gal（1：17.63：17.54和1：15.72：16.21）。然后用木糖酶endo-P-1,4-xylanase在不同时间段酶解LbGp4-0L,经GC检测,酶解效果不明显。选用酸降解,以40mmol/L H2SO4,在80℃条件下水解10小时,得到以半乳糖为主要糖组成的半乳聚糖主链,命名为LbGp4-OL-P。对LbGp4-OL-P以0.5 mol/L TFA在80℃条件下水解4小时,经ESI-MS检测,得到聚合度为2-8的寡聚半乳糖,命名为OL-oligosaccharides。3.枸杞糖复合物LbGp4相关寡糖片段的免疫活性鉴定采用淋巴细胞转化实验,以[甲基-3氢]胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法检测LbGp4相关多糖及寡糖片段对Balb/C小鼠脾细胞增殖反应的影响。经检测,LbGp4-OL可以明显促进小鼠脾细胞增殖,并且具有一定的量效关系,其经过FITC标记后,免疫活性依然存在。但对于LbGp4-OL-P和OL-oligosaccharides的检测发现,其活性明显降低,且OL-oligosaccharides在高剂量作用下呈抑制作用。结论：通过本课题的研究,获得了LbGp4一系列相应的寡糖片段,虽经免疫活性检测,并非为其活性寡糖片段,但是建立了一种酸法降解LbGp4及其质谱检测、荧光标记的方法,为以后活性寡糖片段的进一步研究奠定了一定的理论基础。由于生物活性的发挥与其结构息息相关,所以今后应该以构效关系为依据,研究多糖的可控性降解,从而获得理想的活性寡糖片段。