论文摘要
目的:小肠缺血再灌注（intestine ischemia reperfusion,IIR）除发生于肠道及其系膜血管自身疾病外,还可继发于多种临床疾病的病理生理过程中,引起全身系统性损伤,而肝脏则是缺血再灌注的最直接器官。本课题旨在研究IIR后肝损伤机制及蛋白酶体抑制剂乳孢素对IIR肝损伤的保护作用,并在分子水平为乳孢素的临床应用提供实验依据。方法:将32只健康雄性Wistar大鼠随机分为4组:（1）假手术组（阴性对照组）;（2）肠缺血再灌注组（I/R组）;（3）低剂量乳孢素预处理组（0.2mg/kg）;（4）高剂量乳孢素预处理组（0.6mg/kg）。I/R组及乳孢素预处理组用无创小血管夹夹闭肠系膜上的动脉（ superior mesenteric artery,SMA）1h,再灌注4h,建立肠缺血再灌注损伤模型;乳孢素预处理组术前1h腹腔内注射乳孢素;阴性对照组仅进行剖腹术及SMA分离术。再灌注结束,取血,肝和肠组织。检测:（1）肝、肠损伤指标:肝ALT、AST和LDH水平的测定,光镜下观察小肠和肝组织学改变;（2） 20S蛋白酶体活性; （3）中性粒细胞激活相关指标:肝组织髓过氧化酶（myeloperoxidase,MPO）活力及细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion mdecule,ICAM-1）表达情况;（4）肝组织NF-κB的表达。结果:1、与假手术组相比,I/R组:（1）组织形态学见肝组织有明显病理损伤,表现为肝组织水肿、出血和炎性粒细胞浸润。（2）肝功血清酶学检测:AST、ALT和LDH均显著升高（p<0.05,p<0.01,p<0.05）;提示肝功能严重受损。（3）肝组织MPO水平显著升高（p<0.05）;20S蛋白酶体活性无明显变化（p>0.05）。（4）免疫组织化学检测:肝组织ICAM-1和NF-κB表达均显著增强。2、采用乳孢素预处理后,与I/R组相比,0.6mg/kg乳孢素预处理组:（1）组织形态学见肝、肠损伤程度明显减轻。（2）肝功能改善,表现为血清AST、ALT和LDH水平显著降低（p<0.05,p<0.05,p<0.05）。（3）肝、肠组织过氧化损伤及白细胞浸润减轻,表现为肝脏MPO含量减少（p<0.05）; 20S蛋白酶体活性降低（p<0.01）。（4）肝组织中ICAM-1和NF-κB表达减弱。结论:（1）小肠缺血再灌注可以导致严重的肝损伤;（2）肠缺血再灌注肝损伤机制复杂,其发生和发展与NF-κB激活有关;（3）乳孢素预处理对肠缺血再灌注导致的肝损伤有明显的保护作用,且呈剂量依赖性;（4）蛋白酶体抑制剂乳孢素通过抑制20S蛋白酶体、NF-κB的活性,抑制ICAM-1表达和中性粒细胞浸润。