米诺环素对腹透管表皮葡萄球菌生物膜作用的体外研究

论文摘要

目的：以腹膜透析管为载体建立表皮葡萄球菌（staphylococcus epidermidis, SE）生物被膜（biofilm, BF）模型,探讨米诺环素对腹透管表皮葡萄球菌生物膜形成的影响,对生物膜的破坏作用。方法：（1）体外培养生物膜：以表皮葡萄球菌临床分离株作为实验菌株,采用LB肉汤-腹透管进行生物被膜的培养,建立体外生物被膜模型；（2）生物膜形成干预试验：微量肉汤稀释法测定米诺环素的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）、建模时就加入1/16MIC的米诺环素,通过连续稀释法计算BF内活菌数、结晶紫染色法半定量测定载体表面BF、扫描电子显微镜（scanning electron microscope, SEM）观察载体表面形成的BF；（3）米诺环素对生物膜结构的破坏作用：建模成功后,以1/4MIC、1/2MIC、1MIC浓度米诺环素分别作用于表皮葡萄球菌早期BF和成熟BF,作用0、4、8、24小时后,通过连续稀释法计算BF内活菌数、SEM观察BF形态改变,以评估米诺环素对生物膜的影响。结果：（1）建模1天,银染后光学显微镜下观察见载体表面散在分布着点状、斑片状黑染物质,经扫描电镜观察可见载体表面菌落粘附成团,可见黏液样物质,早期BF形成；建模3天,光学显微镜下观察见载体表面覆盖棉絮状致密黑染物质,电镜观察可见菌体被黏液样物质包绕,形成浓厚云雾状、蘑菇状成熟BF；（2）米诺环素对表皮葡萄球菌的最低抑菌浓度是4μg/ml,1/16MIC的米诺环素可抑制腹膜透析管上生物膜的形成,连续稀释法对BF内活菌计数,米诺环素组均较对照组减少（P<0.05）,结晶紫染色法半定量测定BF,米诺环素组均少于对照组（P<0.05）,电镜扫描观察见米诺环素组BF变稀薄,菌体分布较对照组稀疏,粘液样物质减少；（3）对早期膜,1/4MIC、1/2MIC、1MIC的米诺环素可破坏早期膜,1/2MIC、1MIC的米诺环素可破坏成熟膜,药物作用0、4、8、24h后,连续稀释法对BF内活菌计数,米诺环素组均较对照组减少（P<0.05）,电镜扫描观察见米诺环素组细菌散在分布,膜结构变稀薄,立体结构消失。结论：（1）采用LB肉汤-腹透管系统培养,表皮葡萄球菌临床分离株可形成生物被膜。（2）亚抑菌浓度的米诺环素可抑制生物膜的形成。（3）米诺环素单独使用对早期及成熟的BF均有破坏作用。

论文目录

• 中英文縮略语
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 研究方法
• 3 米诺环素对早期及成熟表皮葡萄球菌BF的影响
• 4 统计学分析
• 结果
• 1.生物膜形成定性实验结果
• 2.银染法快速鉴定BF的形成
• 3.SEM观察载体表面BF
• 4.MIC结果
• 5.米诺环素对生物膜形成的影响
• 6.药物对早期及成熟生物膜的作用
• 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢