灯盏细辛提取物对高压状态下视网膜保护作用的基因调控研究

论文摘要

目的:1.观察DSX对高压培养大鼠RGCs保护作用的基因调控。2.观察DSX对持续性高眼压大鼠视网膜保护作用的基因调控。3.探讨DSX的视网膜保护机制。方法:1.建立4小时80mmHg体外高压培养RGCs模型,利用基因芯片技术研究压力对大鼠RGCs基因表达的影响。2.在高压培养RGCs中加入DSX进行干预,利用基因芯片技术,观察DSX对RGCs基因表达的调控。3.采用Akira法,建立持续性高眼压大鼠模型,利用基因芯片技术研究持续性高眼压对大鼠视网膜基因表达的影响。4.用DSX灌胃持续性高眼压大鼠1月,利用基因芯片技术,观察DSX对高眼压大鼠视网膜基因表达的调控。结果:1.模型组和空白组RGCs有差异表达基因108条,其中凋亡基因NGFR、PAWR、S100B、ESTs和细胞骨架蛋白基因表达上调,表达下调的基因主要涉及神经系统发育、神经冲动传导、突触传递、离子通道性能、神经生理过程、细胞间信号转导、细胞黏附与细胞外基质等功能基因.2.RGCsDSX组和模型组差异表达基因51条,其中凋亡抑制基因Bcl2a1和Spp1上调,凋亡基因NGFR下调,4条外部生理刺激调控基因上调,3条ATPase活性基因上调;3.RGCs阳性对照组和模型组差异表达基因41条,其中凋亡基因S100B和NGFR表达下调,凋亡抑制基因Hmoxl上调;4.模型组和空白组差异表达基因22条,其中凋亡基因NGFR上调,CRYBB1下调;5.DSX组和模型组差异表达基因17条,其中凋亡基因NGFR表达下调,CRYBB3、CRYGD、CRYBB2表达上调。结论:1.高压导致谷氨酸代谢转运相关基因下调,谷氨酸代谢转运功能紊乱,造成细胞外Glu堆积,从而促进Ca2+内流,细胞内Ca2+超载,引发细胞信号转导系统的级联反应,上调凋亡基因的表达使RGCs凋亡。2.DSX可提高RGCs对外界刺激的反应,改善能量代谢,清除Glu,减轻Ca2+内流,避免细胞内Ca2+超载,阻断细胞内信号转导途径,使凋亡基因NGFR表达下调。3.DSX能上调凋亡抑制基因Bcl2a1和SPP1的表达,上调对RGCs有保护作用的晶体蛋白相关基因的表达从而保护视网膜。4.DSX对视网膜的保护作用靶点多、机制复杂,其保护作用可能是凋亡抑制基因与凋亡基因,在高眼压等病理状态下的拮抗与协同作用的结果。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一部 分高压对体外培养大鼠RGCs基因表达影响的研究
• 1.1 实验目的
• 1.2 材料与方法
• 1.2.1 实验材料
• 1.2.2 实验方法
• 1.3 实验结果
• 1.3.1 RGCs生长状况
• 1.3.2 RGCs鉴定结果
• 1.3.3 总RNA纯度、浓度和完整性测定结果
• 1.3.4 芯片质控结果
• 1.3.5 差异基因表达结果
• 1.4 小结
• 第二部分 DSX对高压培养大鼠RGCs基因表达调控的研究
• 2.1 实验目的
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 RGCs生长状况
• 2.3.2 RGCs鉴定结果
• 2.3.3 总RNA纯度、浓度及完整性测定结果
• 2.3.4 芯片质控结果
• 2.3.5 差异基因表达结果
• 2.4 小结
• 2.4.1 DSX组与模型组差异基因表达
• 2.4.2 阳性对照组与模型组差异基因表达
• 2.4.3 DSX组与阳性对照组调控相似基因
• 第三部分 持续性高眼压对大鼠视网膜基因表达影响的研究
• 3.1 实验目的
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.2.3 检测指标及方法
• 3.2.4 统计方法
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 眼压测量结果
• 3.3.2 持续性高眼压对大鼠视网膜基因表达调控
• 3.4 小结
• 第四部分 DSX对持续性高眼压大鼠视网膜基因表达调控的研究
• 4.1 实验目的
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验方法
• 4.2.3 检测指标及方法
• 4.2.4 统计方法
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 眼压测量结果
• 4.3.2 DSX对持续性高眼压大鼠视网膜基因表达的调控
• 4.4 小结
• 讨论
• 1 本研究涉及的主要基因功能
• 1.1 凋亡诱导基因及其功能
• 1.2 凋亡抑制基因及其功能
• 1.3 其它基因及其功能
• 2 高压导致RGCs凋亡的机制探讨
• 3 DSX对RGCs保护的基因调控及相关机制
• 结论
• 问题与展望
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 综述一 本研究涉及的部分基因功能
• 1.1 细胞信号转导基因及其功能
• 1.1.1 CAV3基因和小窝蛋白3
• 1.1.2 VAMP基因与囊泡相关膜蛋白
• 1.1.3 TGFB2基因和转化生长因子B
• 1.1.4 KDR基因和VEGF
• 1.1.5 钙结合蛋白相关基因及其蛋白
• 1.2 其它基因及其功能
• 1.2.1 细胞外基质和黏附分子及其基因
• 1.2.2 MMP12基因和基质金属蛋白酶
• 1.2.3 CDH13基因和钙粘蛋白13
• 1.2.4 KLF5基因及Kr（u∣¨）ppel样转录因子
• 1.2.5 RFR基因P及RF相关肽
• 1.2.7.CNR1基因及大麻素CB1受体
• 1.2.8 MAPT基因及微管结合蛋白Tau
• 1.2.9 EGR1基因和早期生长反应因子1
• 1.2.10 GFAP基因和神经胶质纤维酸性蛋白
• 参考文献
• 综述二 RGCs培养及高眼压大鼠模型评价
• 2.1 RGCs的体外培养及模型
• 2.2 大鼠持续性高眼压模型
• 参考文献
• 综述三 中医药与基因组学研究进展
• 3.1.中医证候学的基因组学研究
• 3.1.1 中医证候学与相关（易感）基因研究
• 3.1.2.动物模型基因的研究
• 3.2.中医药治疗作用与基因调控、修饰研究
• 3.3.中药的基因组研究
• 3.3.1 用于道地药材的鉴定
• 3.3.2 有效中药的筛选
• 3.3.3 用于中药的毒性评价
• 3.3.4 中药复方作用机理的基因组学研究
• 3.4.基因芯片技术与中医药研究技术
• 参考文献
• 在读期间公开发表的学术论文、科研成果