论文摘要
第一部分基因芯片检测耐药性癫痫患者颞叶脑组织中生长锥相关基因表达目的:了解耐药性癫痫患者颞叶脑组织中与生长锥相关基因的表达,探索其在耐药性癫痫易感性形成、轴突异常生长中的作用。方法:提取40例耐药性癫痫患者与14例对照组颞叶脑组织的RNA,分别逆转录合成荧光分子掺入的cDNA做探针,将含有4 096条人类基因PCR产物制成基因芯片,芯片杂交和严格洗片后,用ScanArray4000荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,GenePix Pro 3.0软件分析扫描的荧光信号结果,利用计算机分析耐药性癫痫患者和正常对照组颞叶脑组织中与生长锥相关的基因的表达。结果:耐药性癫痫组颞叶脑组织中integrin alpha2mRN,laminin beta1mRNA,coronin1CmRNA,myosin1EmRNA,tubulin gama1mRNA,neural adhesion molecule NB-3mRNA , neural cell adhesion molecule2mRNA , cadherin18mRNA, sorting nexin 17mRNA ,microtubule-associated protein 2 mRNA, microtubule-associated protein 1AmRNA表达上调, tubulin delta1mRNA, microtubule-associated protein 1BmRNA基因表达下调。结论:耐药性癫痫患者颞叶脑组织中许多与生长锥相关的基因表达异常,提示其可通过影响生长锥的异常生长而在耐药性癫痫的易感性形成、轴突异常生长中起作用,是耐药性癫痫的耐药性形成的可能原因。第二部分难治性癫痫患者脑组织中整合素α2和层粘连蛋白β1的检测目的:了解层粘连蛋白-整合素跨膜系统在难治性癫痫患者颞叶脑组织中的表达,探讨其在难治性癫痫发病机制中的作用。方法:从难治性癫痫脑库中随机抽取40例难治性癫痫患者术后脑组织（其中颞叶32例,海马8例）,利用FQ-PCR、免疫组化法、免疫荧光法和western blotting从基因和蛋白水平检测了难治性癫痫患者海马和颞叶脑组织中层粘连蛋白β1（lamininβ1）和整合素α2（integrinα2）的表达,并与对照组进行比较。结果:FQ-PCR显示难治性癫痫脑组织目标基因（lamininβ1mRNA和integrinα2mRNA）的浓度较正常对照组基因的浓度明显增高,难治性癫痫颞叶脑组织的平均相对拷贝数高于对照组的平均相对拷贝数（lamininβ1mRNA为8.09E-03/4.81E-03 ; integrinα2mRNA为3.08E-01/1.49E-01,P <0.05）。在难治性癫痫组,目标基因海马的相对拷贝数较颞叶高于对照组（lamininβ1mRNA为1.10E-02/6.80E-03;integrinα2mRNA为5.95E-01/2.50E-01,P均<0.05）。免疫组织化学结果证实lamininβ1和integrinα2在难治性癫痫患者脑组织中海马和颞叶的表达与对照组相同部位比较明显增强（光密度值:lamininβ1颞叶= 0.3597±0.0108/0.0967±0.0269 ,海马=0.5431±0.0129/0.0715±0.0203 ; integrinα2颞叶=0.4171±0.0219/0.0374±0.0094 ,海马=0.5381±0.0194/0.0526±0.0103, P均<0.05）。在荧光显微镜下,lamininβ1和integrinα2的免疫反应阳性细胞分别发出明亮的绿色荧光,阳性产物位于胞膜和胞浆内。western blotting结果进一步证实lamininβ1和integrinα2在难治性癫痫患者脑组织中海马和颞叶的表达明显增强（光密度值:lamininβ1颞叶= 0.6508±0.1795/0.3374±0.0937,海马=0.7503±0.1975/0.3431±0.0498 ; integrinα2颞叶=0.5343±0.0694/0.3095±0.0526,海马=0.9043±0.0921/0.5951±0.0827,P均<0.05）结论:在难治性癫痫患者脑组织,层粘连蛋白-整合素跨膜系统的lamininβ1 mRNA、integrinα2 mRNA及其蛋白表达均增高,可能是导致难治性癫痫生长锥异常生长,异常神经网络形成的一个重要原因,这些改变在难治性癫痫的发病及维持中可能起一定的作用。
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