自制PV液对大鼠肝脏低温保存的实验研究

论文摘要

目的:探讨自制PV液对大鼠肝脏低温保存的效果及机理,为PV液在供肝保存中的应用提供一定的理论和实验依据。材料与方法:1.采用规范的制剂标准,按照配方配制肝脏保存液PV液,采用无菌滤过法消毒,PH值调定为8.0±0.5,渗透压为（320±10）mOsm/L。2.实验分组:采用成年、健康、清洁级、雄性Wistar大鼠90只,体重200250g。根据使用灌洗保存液的种类将大鼠随机的分为UW液组、PV液组、NS组,每组30只大鼠,再根据不同的保存时间将3组随机分为保存0h、6h、12h、18h、24h 5个亚组,每个亚组6只大鼠。3.动物模型:戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后采用大鼠离体肝脏再灌注模型（IPRL）为实验模型,对大鼠肝脏进行灌注后低温保存。4.检测内容:分别在保存0h、6h、12h、18h、24h后收集灌注流出液,测定保存不同时段后肝脏酶学变化（ALT、AST、LDH）、灌注流出液中氧自由基代谢产物丙二醛（MDA）与超氧化物歧化酶（SOD）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,记录离体灌注时胆汁分泌量,光镜、电镜下观察肝脏组织学变化。结果:1.酶学指标:三组灌注流出液中酶含量均随着保存时间的延长而增高,相同时相灌注流出液中ALT、AST、LDH含量均比NS组显著降低（P<0.05）,UW液组与PV液组之间无显著差异（P>0.05）,但PV液组有低于UW液组的趋势。2.丙二醛与超氧化物歧化酶含量:每组的MDA含量均随着保存时间的延长而增高,而SOD则相反,随着保存时间延长而减少。PV液组与UW液组各时相MDA含量明显低NS组（P<0.01）,SOD高于NS组,保存12h后PV液组的MDA含量低于UW液组（P<0.01）,PV液组与UW液组的SOD含量无显著差异（P>0.05）。3.肿瘤坏死因子-α含量:PV液组与UW液组各时相TNF-α值与NS组相比有显著减少（P<0.01）,保存6h后PV液组与UW液组有统计学差异（P<0.05）,PV液组TNF-α值高于UW液组。4.胆汁分泌量:肝脏开始灌注后,即有金黄色的胆汁分泌出,随着保存时间的延长,胆汁分泌量逐渐减少。各时相相比,PV液组与UW液组胆汁分泌量显著高于NS组（P<0.05）,保存18h后,PV液组明显低于UW液组（P<0.05）。5.光镜观察:随着保存时间的延长,肝脏损伤逐渐加重,肝细胞逐渐出现胞浆疏松、水肿甚至坏死,肝窦内皮细胞肿胀,逐渐脱落至肝窦隙。各组之间相比,UW液组损伤最轻,NS组损伤最重,主要体现在细胞水肿方面,肝小叶及肝窦结构尚清晰、规则。6.电镜观察:随着保存时间的延长,细胞肿胀加重,细胞质溶解,肝细胞空泡变性,而线粒体、内质网无明显结构变化。各组之间相比较,NS组肝细胞水肿明显,部分出现溶质溶解、核固缩,UW液组与PV液组轻度水肿,未见明显的细胞结构及组成异常。结论:PV液与UW液对Wistar大鼠肝脏功能具有保护作用,减轻肝脏的缺血-再灌注损伤;两者短时间保存效果相当,随着保存时间的延长,PV液在防止细胞水肿和抑制炎症因子产生、释放方面略差,但在抗氧化及清除氧自由基方面优于UW液。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 PV 液的配制
• 2.1 PV 液的组成
• 2.2 配置过程
• 2.3 PV 液的一般性质
• 第3章 材料与方法
• 3.1 主要试剂和仪器
• 3.2 实验动物和分组
• 3.3 动物模型的建立
• 3.4 检测指标与方法
• 3.5 实验流程
• 3.6 数据处理与统计学分析
• 第4章 结果
• 4.1 再灌注流出液酶学指标
• 4.2 丙二醛与超氧化物歧化酶含量
• 4.3 肿瘤坏死因子-α含量
• 4.4 胆汁分泌量
• 4.5 光镜观察
• 4.6 透射电镜观察
• 第5章 讨论
• 5.1 PV 液保存肝脏原理的探讨
• 5.2 肝脏缺血-再灌注损伤的作用机制
• 5.3 PV 液对肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用探讨
• 5.4 PV 液对大鼠肝脏低温保存的效果：与UW 液的对比
• 第6章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 攻读研究生期间研究成果
• 附带综述