论文摘要
目的：通过检测牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide，Pg．LPS）对体外培养人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts，HPDLF）胶原吞噬作用，以及对整合素α2 mRNA表达的影响，探讨Pg．LPS通过调节HPDLF的胶原吞噬作用导致牙周组织胶原过度降解可能的作用机制。方法：1．体外培养正常人牙周膜细胞HPDLF，以含不同浓度(0，10-1，100，101，102，103，104ng／ml)Pg．LPS的培养基分别孵育一定时间（6，12，24，48h），采用MTT法检测HPDLF增殖水平的改变。2．分别以鼠尾胶原及鼠血清白蛋白（RSA）包被荧光微球，免疫荧光定位法鉴定包被是否成功。3．流式细胞仪检测并分析，在不同Pg．LPS浓度(0，10-1，100，101，102ng／ml)、作用时间（12，24，48h）及吞噬时间（0.5，1，2，4h）条件下，HPDLF对胶原荧光微球的吞噬率。4．采用RT-PCR法检测不同浓度(0，10-1，100，101，102 ng／ml)Pg．LPS作用24小时后，HPDLF的整合素α2 mRNA表达水平。结果：1．Pg．LPS对细胞增殖促进与抑制的影响均在6h内显效（p＜0.05），在浓度为10-1，100，101，102ng／ml时，促进HPDLF细胞增殖，12h时100ng／ml的浓度对增殖促进作用最强（p＜0.05）；在浓度为103、104ng／ml时，抑制HPDLF细胞增殖，且浓度越高抑制作用越明显，48h时104ng／ml的浓度对细胞生长增殖抑制作用最强（p＜0.05）。2．未经Pg．LPS作用的HPDLF在0.5h内即开始吞噬胶原及RSA微球，RSA微球吞噬率在1h达到峰值后保持稳定；而胶原微球吞噬率在4h才达到峰值，随后保持稳定；HPDLF对胶原微球的6h吞噬率是对RSA微球吞噬率的8～10倍（p＜0.05）。Pg．LPS不同作用时间结果显示，100ng／ml Pg．LPS作用12h可刺激HPDLF胶原吞噬率增高，24h后达到峰值，48小时逐渐下降，但仍高于正常细胞吞噬率（p＜0.05）。当10-1，100，101，102ng／ml浓度的Pg．LPS分别作用24h后，HPDLF在各吞噬时间段（0.5，1，2，4h）吞噬率显示：各实验组的吞噬率均随吞噬时间的延长而逐渐增高（p＜0.05）；不同浓度的Pg．LPS均能刺激胶原吞噬活性，Pg．LPS在10-1ng／ml浓度时既能促进胶原吞噬，100ng／ml浓度作用的HPDLF吞噬率最高，促进作用最强（p＜0.05）；在101、102ng／ml高浓度时吞噬率有所下降，浓度越高下降越明显（p＜0.05）。3．10-1，100，101，102 ng／ml浓度的Pg．LPS作用24h均能使HPDLF的整合素α2 mRNA表达上调（p＜0.05）；表达量在100 ng／ml浓度时达到最高，而后随浓度升高表达量逐渐下降（p＜0.05）。结论：1．HPDLF对胶原的吞噬具有特异性。2．Pg．LPS能够显著增强HPDLF的胶原吞噬活性。3．Pg．LPS能够使HPDLFⅠ型胶原受体整合素α2的mRNA表达水平升高。4．Pg．LPS可能通过上调HPDLF整合素α2 mRNA的表达促进其胶原吞噬作用，是Pg．LPS导致基质胶原过度降解、牙周结缔组织破坏机制之一。
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标签：脂多糖论文; 牙周膜成纤维细胞论文; 胶原论文; 吞噬论文; 整合素论文;