论文摘要
从长期受有机磷农药污染的土壤中分离到辛硫磷降解菌XSP-1和甲基对硫磷降解菌SMSP-1。经生理生化鉴定和16S rRNA基因同源性比较,将它们初步鉴定为戴尔福特菌属（Delftia sp.）XSP-1（GenBank Accession No.EF061135）,及寡养单胞菌属（Stenotrophomonas sp.）SMSP-1（GenBank Accession No.EU312979）。菌株XSP-1在pH5.0-9.0范围内生长良好;最适生长温度为30℃;好氧性生长;在5-35g╱L NaCl范围生长较好;在以果糖为碳源,以有机氮为氮源的培养基中生长较好。菌株XSP-1能在7小时内完全降解100mg╱L的辛硫磷;最适降解条件为pH为7.0,35℃。该菌株对甲基对硫磷、倍硫磷和杀螟硫磷也有较好的降解能力,对毒死蜱降解能力较差。菌株SMSP-1在pH5.0-10.0范围内生长良好;最适生长温度为30℃和35℃;好氧性生长;在5-45g╱L NaCl范围生长较好;在以葡萄糖为碳源,以有机氮为氮源的培养基中生长较好。SMSP-1在48h内能将20mg/L的甲基对硫磷完全降解为对硝基酚,但是对对硝基酚没有进一步的降解能力;降解甲基对硫磷的最适条件为pH7.0、30℃。菌株SMSP-1还能降解杀螟硫磷、乙基对硫磷、倍硫磷和辛硫磷,对毒死蜱没有降解能力。通过构建基因组文库,克隆到菌株SMSP-1的有机磷水解酶基因,运用在线分析软件,推断出有机磷水解酶的结构基因、信号肽及启动子序列。通过在线比对同源性,该基因与Pseudomonas pseudoalcaligenes C2-1中的ophc2基因（GenBank accessionNo.AJ605330）同源性为98%,这是国际上第二次克隆到有机磷水解酶基因ophc2,也是第一次在寡养单胞菌属中克隆到这个基因。根据基因序列分析结果设计特异性引物,通过PCR扩增到带有信号肽和不带有信号肽的ophc2结构基因,分别将其构建到表达载体pET29a中,转化到E.coli BL21（DE3）中进行了表达。根据蛋白电泳结果推断,在有机磷水解酶OPHC2中可能存在着一个能被菌株BL21（DE3）胞内的某个蛋白酶识别并切割的位点,并且该位点位于OPHC2的C-端。