论文摘要
自90年代起,H9亚型禽流感病毒（AIV）引起的禽流感（AI）在我国和世界其他许多国家广泛流行,给养禽业造成了严重的经济损失,其可能诱发的公共卫生问题也引起了人们的关注。实施严格的生物安全措施和在流行地区使用疫苗是控制该病的主要方法。DNA疫苗由于能够同时激发机体产生细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫应答,且安全性和稳定性好,能够克服传统疫苗的诸多不足,将该技术应用于兽医领域的研究越来越多。运用减毒胞内菌运送DNA疫苗能够将DNA直接运送到专业性抗原提呈细胞（APC）内,大大提高了DNA疫苗的摄入效率。目前已经有了一些比较好的减毒沙门氏菌菌株被用作弱毒苗预防禽类沙门氏菌感染或作为禽类疫苗的原核表达载体,用这些减毒疫苗株作禽类DNA疫苗的真核表达载体的研究也正在尝试中。本研究构建了以减毒鼠伤寒沙门氏菌运送的H9N2亚型AIV血凝素（HA）DNA疫苗,并以鸡作为试验动物对其相关免疫保护效力进行了探讨。 根据GenBank中已发表的H9N2亚型AIV HA基因序列设计并合成一对PCR引物,通过RT-PCR扩增A/Chicken/Shanghai/3/2002的HA基因。凝胶电泳结果显示,扩增产物为1.7kb的单一条带,与预期结果相符。将PCR产物克隆入pGEM?-TEasy Vector并进行测序,根据测定的核苷酸序列推导的氨基酸序列表明,A/Chicken/Shanghai/3/02（H9N2）株与A/Chicken/Shanghai/4-4/01（H9N2）株、谱系Ⅲ中国代表株A/Chicken/Beijing/1/94（H9N2）株的同源性较为接近分别为96.1%和95.1%,说明三者之间亲源关系比较密切,而和谱系Ⅱ亚洲代表株A/Chicken/Korea/38349-p96323/96的氨基酸同源性相对较低,为85.8%。用KpnⅠ和Xho Ⅰ将HA基因从克隆载体切出。分别插入真核表达载体pVAXl和asd-pVAXl的相应位点,构建成重组表达载体pVAX-HA和asd-pVAXl-HA,转染COS-7细胞,通过间接免疫荧光试验证明HA基因在该细胞中获得了瞬时表达,说明构建的两种质粒可以用于DNA疫苗试验。最后将上述两种真核表达质粒导入减毒鼠伤寒沙门氏菌
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