鳜骨骼肌慢肌胚胎期发生与胚后生长发育

论文摘要

骨骼肌约占鱼体体重的40–60%。骨骼肌由白肌（快肌）、红肌（慢肌）和粉肌组成。肌球蛋白是构成骨骼肌粗丝的主要成分，其结构由两条重链（MyHC）和两对轻链（MyLC）组成。与哺乳类不同类型肌纤维交叉分布不同，鱼类不同类型肌纤维有较明显的分区，不同类型骨骼肌的发育特征也不相同。MyoD是生肌调节因子MRFs家族的主要成员之一，是脊椎动物肌肉发育的主要调控基因，参与骨骼肌细胞形成与分化。为全面了解鳜（Siniperca chuatsi）骨骼肌的形成和发育特征，本论文开展了以下研究工作：采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增法（RACE）技术分别克隆了鳜慢肌肌球蛋白重链S2和LMM区cDNA序列（长度分别为1938bp,1814bp），与本实验室前期克隆的S1序列（2520bp）进行拼接后，得到鳜慢肌肌球蛋白重链全长序列5891bp，其中，开放阅读框5751bp，3端非翻译区140bp。鳜慢肌肌球蛋白重链与快肌肌球蛋白重链的核苷酸序列相似性为80%，氨基酸序列相似性为88%。根据所得到的cDNA序列分别设计快肌和慢肌特异性引物，合成地高辛标记的特异性RNA探针，通过原位杂交技术研究了鳜胚胎期慢肌与快肌的发生特征，结果表明，慢肌在受精后32h开始发育，而快肌在受精后34h开始发育，慢肌的发育稍早于快肌。此外，还采用RT-PCR技术克隆了鳜慢肌和快肌MyoD基因的部分片段，通过NCBI比对发现，获得了2种慢肌表达类型的MyoD（sMyoD1、sMyoD2），而1种快肌表达类型的MyoD（fMyoD1）。鱼类快肌和慢肌分别占据骨骼肌的不同位置，表现不同的生长发育特征。为了解鳜慢肌纤维的胚后发育特征，制作了孵化后1-33日龄个体的石蜡切片，采用慢肌特异抗体的免疫组织化学染色技术，观察了背鳍起点处躯干横切面慢肌的发育变化特征，并利用图像分析软件统计慢肌纤维的数目和面积。结果表明，孵化后慢肌位于水平肌隔附近，呈楔型，之后向背、腹两侧生长。孵化后1-9日龄慢肌为单层肌纤维，11日龄发育为多层肌纤维，19日龄慢肌覆盖侧线附近，33日龄慢肌延伸至背侧第2背肌节、腹侧腹部肌肉2/3处，并在水平肌隔和侧线处分别形成两个慢肌群。位于骨骼肌最外层的扁平状表层细胞，可能为慢肌增生生长的主要来源。躯干单侧慢肌肌纤维数目由孵化后6个增加至315个，总面积从13.18μm2增加到7839.58μm2，除孵化后13日龄的增生生长占优势外，其他发育阶段，肥大生长一直占主导优势。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 1.1 鱼类骨骼肌组成特征
• 1.1.1 不同类型骨骼肌特征
• 1.1.2 肌球蛋白重链的研究
• 1.2 鱼类骨骼肌发育特征
• 1.2.1 胚胎期不同类型骨骼肌发生研究
• 1.2.2 胚后期骨骼肌的生长与发育特征
• 1.2.2.1 增生生长
• 1.2.2.2 肥大生长
• 1.3 鱼类生肌因子 MyoD 的研究
• 1.3.1 MyoD 的分子结构与功能
• 1.3.2 MyoD 的表达类型
• 1.4 本研究目的和意义
• 第二章 鳜胚胎时期慢肌和快肌的发生
• 2.1 前言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 鳜慢肌肌球蛋白重链 cDNA 序列
• 2.3.2 胚胎期快肌和慢肌表达特征
• 2.3.3 MyoD 部分序列
• 2.4 讨论
• 第三章 鳜慢肌胚后发育生长特征
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 免疫组化试剂的配制
• 3.2.2 实验材料的准备与处理
• 3.2.3 实验方法
• 3.3 实验结果与分析
• 3.3.1 鳜骨骼肌慢肌的发育
• 3.3.2 鳜慢肌纤维的生长特征
• 3.4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 硕士期间发表论文
• 致谢