海昆肾喜对糖尿病肾病大鼠血管内皮生长因子调控机制的研究

论文摘要

近年来随着人们生活水平提高及生活方式的改变，糖尿病（DiabetesMellitus，DM）的发病率逐年增加，糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy，DN）作为糖尿病的主要并发症之一，其发病率也呈上升趋势。由于DN起病隐匿，临床上一旦出现大量蛋白尿，肾脏损害往往难以逆转，患者很快进入尿毒症期，病死率高。由此可见，积极从事DN发病机制及防治措施的研究已成为当今肾脏病领域研究的热点。DN的发病机制较复杂，其最根本原因是高血糖和遗传因素，在这些因素与肾脏最终的病理改变之间，起中介作用的可能是各种细胞因子。在众多细胞因子中血管内皮生长因子（Vasular Endothelial growth Factor，VEGF）的作用受到许多学者的关注。海昆肾喜是治疗慢性肾衰竭和早期尿毒症的国家二类中药新药，其主要成分是褐藻多糖硫酸酯（Fucoidan，FPS）。有研究显示，FPS具有多种生物学功能，如降血压、降血脂、降血糖及增强免疫力等作用，本文通过整体动物实验和体外细胞实验，从整体、器官、组织、细胞、蛋白质水平进行研究，旨在探讨该药防治DN的作用机制。目的：通过建立糖尿病肾病大鼠模型，从整体动物实验研究海昆肾喜是否能够有效的改善肾功能、延缓肾纤维化、进而从器官、组织、细胞、蛋白质水平研究海昆肾喜对VEGF的影响，以期阐明该药防治肾纤维化的作用机制。方法：1．清洁级雄性SD大鼠，采用空腹一次性大剂量腹腔注射链脲佐菌素造成糖尿病模型，根据血糖随机分为正常组、模型组、对照药物组（厄贝沙坦）及海昆小大剂量组，共5组，各治疗组给予相应药物。每周测量大鼠体重，每4周测大鼠24小时尿蛋白。第12周末取大鼠血液检测生化指标，同时取大鼠肾脏观察肾组织病理形态学变化并采用肾小球硬化指数及肾小管-间质损伤评分评价各组大鼠肾组织病理改变。2．采用免疫组织化学法检测大鼠肾组织中VEGF的蛋白含量，以及海昆肾喜对其的影响。3．采用MTT方法检测高糖刺激肾小球系膜细胞在12h，24h，48h和60h各不同时相点肾小球系膜细胞的增殖，以及海昆肾喜对其的影响。4．采用western blot检测过高糖刺激肾小球系膜细胞VEGF的蛋白含量，以及海昆肾喜对其的影响。结果：1．海昆肾喜治疗后，大鼠体重明显升高，24h尿蛋白减少，BUN、Scr、TG、肾脏肥大指数明显下降，大鼠肾组织病理改变明显减轻。2．海昆肾喜能够显著下调糖尿病肾病大鼠肾组织固有细胞胞浆中VEGF蛋白含量。3．海昆肾喜能够抑制高糖刺激肾小球系膜细胞的增殖，各时相点以大剂量抑制效果最好。4．海昆肾喜能够明显抑制高糖刺激的肾小球系膜细胞分泌VEGF蛋白，并呈剂量依赖关系。结论：1、海昆肾喜可以改善糖尿病肾病大鼠的肾功能，减少尿蛋白，减轻肾脏的病理损伤，并且有剂量依赖关系。2、海昆肾喜治疗DN的作用机理：细胞水平上，海昆肾喜能够抑制肾小球系膜细胞的增殖，这可能是海昆肾喜防治肾小球硬化的作用机制之一；蛋白质水平上，海昆肾喜能够下调糖尿病大鼠肾组织及高糖刺激的肾小球系膜细胞胞浆内VEGF蛋白的表达，进而减缓肾纤维化的发生，进而抑制肾小球系膜细胞的增殖，减少细胞外基质的积聚，从而延缓DN的发生。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词
• 综述：血管内皮生长因子在糖尿病肾病发病机制中的作用
• 参考文献
• 实验一 海昆肾喜对糖尿病肾病大鼠的药效学实验研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 实验二 海昆肾喜对糖尿病肾病大鼠肾组织VEGF蛋白表达的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 实验三 海昆肾喜对高糖刺激的肾小球系膜细胞增殖的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 实验四 海昆肾喜对高糖刺激的肾小球系膜细胞表达VEGF蛋白的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 致谢
• 个人简历
• 附图