论文摘要
目的:本实验通过建立慢性心衰(CHF)大鼠模型,观察中药益气活血复方对慢性心衰大鼠心肌局部Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达影响。从蛋白学、基因学和组织形态学方面研讨其作用机制及作用靶点,为中医药防治慢性心力衰竭开拓新思路、提供客观科学的实验依据。材料与方法:1.取健康体重200～230克雄性SD级大鼠60只,适应性喂养1周后,通过冠脉结扎法并配合力竭式游泳、饥饿减食等方法造成大鼠慢性心衰动物模型。经多普勒超声心动图检测射血分数(EF),观察大鼠状态,判定慢性心衰大鼠模型造模是否成功。2.将造模成功大鼠随机分为西药组、中药组及模型组,并设立空白对照组。空白对照组和模型组大鼠予常规等容积生理盐水灌胃,各给药组大鼠按人鼠剂量公式换算给药剂量,西药组予以赖诺普利;中药组予益气活血复方。给药6周后处死全部大鼠,取其心肌组织。3.利用实时荧光定量PCR技术、蛋白印迹检测及HE染色光镜下观察等方法,比较空白对照组、模型组、西药组和中药组等各组间大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化情况及心肌组织形态学变化情况。结果:1.慢性心衰动物模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达明显下降,与空白对照组比P<0.01;除西药组Ⅰ型胶原mRNA略有下降外,与模型组比P>0.05;各给药组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA都有明显升高,与模型组比P<0.01;中药组与西药组相比P<0.01。2.慢性心衰动物模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显下降,与空白对照组比P<0.01;各给药组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显升高,与模型组比P<0.01;Ⅰ型胶原蛋白表达中药组与西药组比P<0.01;Ⅲ型胶原蛋白表达中药组与西药组比P>0.05。3.HE染色在光镜下观察结果,空白对照组:心肌细胞排列规整有序,心肌润盘、横纹清晰,心肌细胞核位于心肌细胞边缘,大小、形态正常,肌纤维排列规整,未见断裂、缺损及空白区。模型组:心肌细胞相互交织,无横纹、心肌润盘;肌纤维排列紊乱、断裂及缺失,心肌细胞核固缩,出现部分空白区,异染色质呈现团块状,相邻细胞润盘间隙明显增宽。中药组:心肌细胞排列比较有序,可见到横纹、心肌润盘,心肌细胞核固缩成圆形,位于心肌细胞边缘,偶见心肌纤维断裂、缺损及空白区。西药组:心肌细胞排列较为规整,可见到横纹、心肌润盘,心肌细胞核位于心肌细胞边缘,大小、形态基本正常,偶见有断裂、缺损、空白区。4.慢性心衰模型组Ⅰ型胶原免疫组化法,平均灰度值:45.34±8.10,与空白对照组比P<0.01;中药组:468.86±9.87,与模型组比P<0.01;西药组:396.20±39.95,与模型组比P<0.01;中药组与西药组相比P>0.05。5.慢性心衰模型组Ⅲ型胶原免疫组化法,平均灰度值:61.46±7.11,与空白对照组比P<0.01;西中药组:132.40±55.34,与模型组比P<0.01;中药组:108.26±8.89,与模型组比P<0.01;中药组与西药组相比P>0.05。结论:1.通过对大鼠冠状动脉结扎结合饥饿、减食与力竭式游泳等方法,经超声心动图检测大鼠心功能及其行为变化,证明本造模方法可行。2.经6周治疗后,利用实时荧光定量PCR、Western blot、免疫组化、HE染色法检测慢性心衰大鼠心肌组织;发现益气活血复方对慢性心衰大鼠心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达相对心肌胶原表达过低的模型组有明显的升高,疗效优于西药治疗组赖诺普利;同时可改善病变心肌细胞超微结构。提示中药益气活血复方可通过调节心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的表达及改善病变心肌细胞的超微结构,从而起到防治慢性心衰的作用。