论文摘要
目的:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是我国最常见的消化系统恶性肿瘤之一,且近年来其发病率和死亡率有逐年升高的趋势。由于其具有侵袭性强,易复发、转移等生物学特性,目前包括手术、放疗、化疗等各种治疗方法的效果均不够理想。因此,明确其侵袭转移的发生机制和探索新的、有效的治疗方法已成为当前肿瘤学研究的热点课题。乙酰肝素酶（heparanase, hpa）是目前发现的哺乳动物细胞中唯一能切割细胞外基质中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖侧链的内源性糖苷酶,在肿瘤组织中广泛表达,通过降解细胞外基质和血管基底膜、释放和活化线形硫酸乙酰肝素侧链结合型的生长因子（如bFGF、VEGF等）诱导血管生成,对促进肿瘤细胞侵袭和转移起重要作用。TNF-α、IL-1β是由多种免疫细胞产生和分泌的较为重要且具有代表性的细胞因子,具有免疫调节、抗肿瘤等多种生物学功能。有研究报道炎症发生时,机体分泌的TNF-α、IL-1β能够刺激内皮细胞Hpa表达上调,从而有利于炎细胞的扩散。此效应在肿瘤发生时是否同样显现则未见报道。本研究通过应用TNF-α、IL-1β分别处理SMMC-7721肝癌细胞,观察Hpa mRNA和蛋白表达的变化,明确TNF-α及IL-1β与Hpa表达之间的关系,为进一步探讨肝癌侵袭和转移的机制以及以Hpa为新靶点的治疗方法提供试验依据。方法:肝癌细胞系SMMC-7721分对照组和试验组。对照组细胞常规培养,试验组细胞分别施加TNF-α、IL-1β干预,设浓度梯度和时间梯度。采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术,测定细胞Hpa mRNA表达的变化,以β-actin作为内参照标准,通过凝胶扫描仪对扩增产物进行DNA电泳条带的光密度值分析,将Hpa与β-actin比值作为Hpa mRNA表达水平的参数,对Hpa产物相对定量;以Western blot方法检测SMMC- 7721细胞胞浆Hpa蛋白表达的变化,同样以β-actin作为内参照标准,对Hpa蛋白进行相对定量分析。所有数据均以x±s表示,采用SPSS12.0统计分析软件进行单因素方差分析（ANOVA）和t检验。P<0.05为有显著差异。结果:1不同浓度的TNF-α、IL-1β作用不同时间后,SMMC-7721细胞Hpa mRNA表达较对照组逐渐增高,且在TNF-α浓度为104U/L-106U/L、IL-1β浓度为0.5μg/L-5.0μg/L范围内存在浓度依赖性（P<0.05）,不存在时间依赖性。2不同浓度的TNF-α、IL-1β作用不同时间对SMMC-7721细胞胞浆Hpa蛋白表达亦有促进作用,其随药物浓度变化的趋势与Hpa mRNA的表达结果一致,且该促进作用存在时间性差异（P<0.05）。结论:1 TNF-α及IL-1β能够在核酸和蛋白水平上促进肝癌细胞Hpa的表达。2低浓度的TNF-α及IL-1β,不仅不能起到抗肿瘤的作用,反而通过促进降解细胞外基质和血管基底膜、诱导血管新生而促进肿瘤细胞的侵袭和转移。