稳定表达μ阿片受体或δ阿片受体HEK293细胞模型的构建与应用

稳定表达μ阿片受体或δ阿片受体HEK293细胞模型的构建与应用

论文摘要

μ阿片受体与δ阿片受体广泛分布于中枢神经系统和外周组织,能够调节多种生理学效应。μ阿片受体激动剂吗啡、海洛因等都有很强的镇痛作用,但是它们会产生很多的副作用。δ阿片受体激动剂产生的副作用小,但是介导的镇痛作用较弱。为了从细胞水平上研究肽类激动剂对μ受体与δ受体的亲和力和活性,我们构建了能稳定表达μ受体或δ受体的HEK293细胞株。首先我们构建了两个重组质粒pcDNA3.1-FLAG-MOP和pcDNA3.1-MYC-DOP,经测序正确。之后对HEK293细胞进行了转染,筛选出阳性克隆,通过反转录PCR、钙流Western blotting等实验对阳性克隆进行了鉴定,最终构建了能够稳定表达μ受体或δ受体的细胞模型。此细胞模型可以用于研究细胞水平上μ受体或δ受体介导的信号转导,也可用肽类激动剂对于μ受体或δ受体亲和力和活性的筛选。我们还通过放射性配体竞争结合实验、cAMP实验和ERK 1/2信号通路研究了8个内吗啡肽类似物的活性。本实验为以后对阿片肽及其改造物进行活性筛选提供了细胞模型,以期望筛选出具有μ和δ阿片受体双重活性的多肽配体。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 前言
  • 1.1 内源性阿片系统简介
  • 1.2 内源性阿片系统的信号通路简介
  • 1.3 内源性阿片系统的生理学病理学作用
  • 1.4 阿片受体之间的共作用
  • 1.5 内吗啡肽类似物研究
  • 第二章 稳定表达μ阿片受体或δ阿片受体HEK293细胞模型的构建与应用
  • 2.1 立题依据
  • 2.2 实验材料和仪器
  • 2.3 实验方法步骤
  • 2.3.1 质粒pcDNA3.1-FLAG-MOP和pcDNA3.1-MYC-DOP的构建
  • 2.3.2 HEK293细胞的转染及单克隆细胞的筛选
  • 2.3.3 阳性细胞克隆的鉴定
  • 2.3.4 内吗啡肽类似物在HEK293-MOP、HEK293-DOP细胞株上活性研究
  • 2.3.5 数据统计
  • 2.4 结果分析
  • 2.5 讨论
  • 参考文献
  • 附录
  • 在学期间的研究成果和获奖情况
  • 致谢
  • 相关论文文献

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