论文摘要
金发草[Pogonatherum paniceum（Lam．）Hack]是一种我国本土栖息的多年生岩生草本植物，其耐旱耐瘠的特性及株型优美的外观，使其在生态恢复和生态景观建设中极具开发应用价值。然而，金发草种子很小，幼苗抗逆性较差，不易成苗，影响了其在生态工程上的应用。本研究通过组织培养技术获得金发草植株高频再生，并建立了人工种子包裹体系，成功地解决了这一问题。在组织培养体系建立的基础上，对激素对金发草体外再生途径的调控进行了研究。并研究了金发草愈伤组织对PEG胁迫的耐受能力，为利用体细胞无性系突变进行育种奠定了基础。在含有1 mg·L-1 2，4-D，2 mg·L-1NAA和0.2mg·L-1 BAP的MS培养基上，以金发草的成熟种子、小苗、幼叶和茎段为外植体诱导获得愈伤组织。其中以成熟种子的愈伤组织诱导率和再生率为最高。金发草不同的外植体在诱导培养基上诱导产生愈伤组织，转移到分化培养基上后，所有愈伤组织块均可产生大量植株。一颗种子作为外植体，一年内可获得近70，000棵小苗。由愈伤组织再生的芽可以用3％的海藻酸钠和1％活性炭的混合物进行包裹形成人工种子，在无菌条件和有菌条件下都获得了很高的转换成活率。不同类型和不同浓度的生长素诱导了四种不同的愈伤组织类型。高浓度的2，4-D诱导了胚性愈伤组织（类型Ⅰ），而低浓度的2，4-D和所有浓度的NAA诱导了器官性愈伤组织（类型Ⅳ）并直接在原培养基上发育成从生芽。中间浓度的2，4-D或2，4-D与NAA的混合物诱导了一种中间型的愈伤组织（类型Ⅲ），这种愈伤组织既含有体胚发生也含有器官发生。在诱导类型Ⅰ、Ⅲ的过程中会获的无任何再生能力的愈伤组织（类型Ⅱ）。类型Ⅰ、Ⅲ能在没有激素的MS培养基上直接再生。细胞分裂素BAP诱导直接的器官发生。由2，4-D、NAA、BAP诱导的不定芽在含有0.5 mg·L-1 NAA的培养基上生根。在静置液体培养和振荡液体培养方式下，研究了聚乙二醇（PEG）胁迫对金发草愈伤组织的再生能力和游离脯氨酸（F-Pro）积累的影响。发现金发草愈伤组织具有一定的耐PEG胁迫能力，培养方式与PEG胁迫对其再生抑制上存在时间与程度两个方面的表现。振荡培养方式主要表现为延迟再生时间，而PEG胁迫则主要表现为降低再生频率。两种培养方式都能使愈伤组织在PEG胁迫下发生F-Pro积累，F-Pro含量随PEG浓度的增加和培养时间的增长而升高。去胁迫后，大部分愈伤组织都能够恢复再生能力，F-Pro可能在抑制和恢复过程中作用较复杂。因此，在利用愈伤组织筛选抗旱植株时，PEG浓度应在300 g·L-1以上，处理时间3周以上，静置培养更有利于抗旱突变体的筛选。