鸡源肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛粘附基因的原核表达及免疫活性研究

论文摘要

为了解肺炎克雷伯菌菌毛的粘附机制,本课题从临床分离了五株致病性肺炎克雷伯菌,PCR扩增出菌毛的结构基因和粘附素基因,血凝试验进行菌毛分型并鉴定各个菌株的粘附力强弱,选取测序同源性最高、粘附力最强的一株Ⅲ型肺炎克雷伯菌为研究对象,将该株菌的结构基因和粘附素基因与原核表达载体pGEX-4T-1重组,在原核系统BL21（DE3）中表达,应用酶联免疫吸附试验技术对粘附蛋白进行活性鉴定。结果成功扩增了肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛mrkA、mrkD基因,测序结果显示该菌株结果基因A（mrk A）长度是一个543bp的开放阅读框;粘附素基因D （mrk D）长度为987bp,其全长为一个开放阅读框。两个基因在37℃,经过IPTG诱导4～5h为最佳诱导条件,表达产物以包涵体的形式存在;表达蛋白经Glutathione Sepharose-4B纯化后ELISA检测证实Mrk A、Mrk D蛋白均具有免疫活性;本研究为肺炎克雷伯菌病的诊断和预防奠定了基础。

论文目录

• 内容提要
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 克雷伯菌致病因子的研究进展
• 第二篇 研究内容
• 第一章 肺炎克雷伯菌临床分离、鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 Ⅲ型菌毛A、D基因的克隆和序列分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 Ⅲ型菌毛A、D 基因的原核表达与活性检测
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢
• 导师及作者简介