论文题目: 1.livin反义脱氧核苷酸抗癌作用相关研究 2.DCQA食蟹猴长期毒性试验及伴随毒代动力学研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 药理学
作者: 张华东
导师: 陈惠鹏,袁守军
关键词: 细胞凋亡,反义核酸,二级结构
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: Livin是近些年来发现的人IAPs（Inhibitors of Apoptosis Proteins）家族的新成员。根据RNAdraw和Sfold软件计算出的RNA二级结构,设计反义寡核苷酸序列,然后在200nmol·L-1浓度转染SK-MEL1细胞系,结果发现有一些反义序列能够有效的诱导细胞凋亡。其中反义作用最明显的是No.5,其细胞存活率仅为52.6%。利用半定量RT-PCR方法可以检测到livin的mRNA表达量明显降低,同时可增加Caspase活性,降低线粒体膜电位,说明livin可以特异性抑制livin的基因表达,诱导细胞凋亡。用免疫组化和Hoechst33258对转染反义核酸No.5的Hela细胞染色并进行激光共聚焦显微镜观察,可以发现转染后的细胞形态明显改变,多不规则,并且大小不一致。同时细胞的微管排列紊乱,疏密不均,有些聚缩,出现不对称核,甚至出现多核细胞,有些细胞核溶解破碎,染色较浅。这些说明抑制livin的表达能够干扰细胞微管的稳定性,影响纺锤体形成,破坏有丝分裂。 在Raji、Hela、MCF7、SK-MEL1细胞系中利用RT-PCR方法均能检测livin mRNA的表达,而B16小鼠黑色素瘤细胞、HELF人胚肺成纤维细胞未检测出livin。在Hela、HELF和CHO细胞中瞬时转染该基因的哺乳动物表达载体pcDNA3.1（+）,然后用阿霉素诱导这些细胞凋亡,转染livin的细胞存活率分别比对照组高出38.9%、10%和18.4%。这一结果显示livin可在表达该基因的细胞系中抗细胞凋亡并对阿霉素的耐药性起一定作用。
论文目录:
第一部分 livin反义脱氧核苷酸的抗癌作用相关研究
中文摘要
英文摘要(ABSTRACT)
前言
材料与方法
实验材料
一、主要试剂
二、主要仪器设备
三、实验细胞株
实验方法
一、Livin基因哺乳动物表达载体构建及细胞转染
二、细胞培养
三、反义寡核苷酸转染体外培养细胞
四、体外MTT法测定细胞活度
五、计算机程序的获得
六、靶mRNA二级结构计算
七、反义寡核苷酸的设计、合成
八、RT-PCR
九、DNA琼脂糖凝胶电泳
十、靶序列核酸单链概率分析自由能计算
十一、变性凝胶电泳
十二、流式细胞仪检测凋亡细胞
十三、Caspase-3活性测定
十四、测定线粒体跨膜电位
十五、免疫组化染色
十六、AO／EB复合染色
十七、原子力显微镜检测
十八、数据处理
实验结果
一、livin mRNA在肿瘤细胞中的表达
二、livin的哺乳动物表达载体的构建及其功能的研究
三、livin二级结构及其反义寡核苷酸的设计和相关热力学参数计算
四、利用Sfold进行livin mRNA的二级结构预测和相关自由能的计算
五、非变性凝胶电泳
六、No.5反义寡核苷酸对Hela细胞形态的影响
七、No.5反义寡核苷酸的量效关系
八、随机及错配序列对细胞的影响
九、流式细胞仪检测凋亡细胞
十、Hela转染No.5后线粒体膜电位测定
十一、RT-PCR检测livin的表达
十二、Caspase3活性测定
十三、转染反义寡核苷酸No.5后对Hela细胞微管及形态的观察
十四、转染反义寡核苷酸No.5后对Hela细胞核的影响
十五、凋亡细胞的AO／EB复合染色
十六、survivin和livin的反义核酸联合设计
十七、碱基分布对反义作用的影响
十八、反义核酸链自身二级结构与反义作用之间的关系
十九、原子力显微镜观察反义核酸结构
讨论
一、livin的功能研究
二、基于livin mRNA二级结构计算的反义寡核苷酸设计
三、livin的反义核酸应用
结论
第二部分 DCQA长期毒性及伴随毒代动研究
中文摘要
英文摘要(ABSTRACT)
前言
材料和方法
1.实验材料
2.实验仪器
3 实验方法
3.1 给药方案
3.2 毒代动力学研究
3.3 毒代动力学计算
3.4 细胞免疫学检测
3.5 病理组织学检查
3.6 常规毒性指标检测
实验结果
1.DCQA血液毒代动力学
2.粪便中DCQA的测定
3.血液相关免疫指标的测定
4.病理学检查
5.常规毒性检验
讨论
结论
参考文献
致谢
附录Ⅰ.文献综述
附录Ⅱ.在读期间发表文章
发布时间: 2005-09-05
参考文献
- [1].戊地昔布的抗肿瘤作用和机制研究[D]. 李军霞.河北医科大学2004
- [2].抗凋亡基因survivin促进细胞转化的作用机制研究[D]. 朱红霞.中国协和医科大学2002
- [3].PICT-1通过抑制rRNA转录诱导细胞发生死亡性的自噬[D]. 朵燕红.兰州大学2017
相关论文
- [1].盐酸双苯氟嗪的药代动力学和毒代动力学研究[D]. 胡会青.河北医科大学2009
- [2].抗癌药物溴泰君的药代动力学和毒代动力学研究[D]. 宋乃宁.天津大学2009
- [3].Livin异构体在NSCLC中的表达及其基因沉默诱导肺癌细胞凋亡研究[D]. 孙建国.第三军医大学2004
- [4].食蟹猴同种异体肾移植模型的建立及其抗排斥研究[D]. 范晓强.第二军医大学2004
- [5].新型基因工程药物安全性评价方法探讨[D]. 马璟.上海医药工业研究院2004
- [6].凋亡抑制基因Livin在非小细胞肺癌中的表达及其与p53、Bcl-2、细胞增殖、凋亡相关性的研究[D]. 崔肃.中国医科大学2006
- [7].间尼索地平在Beagle犬和恒河猴体内药代动力学及毒代动力学研究[D]. 张志清.河北医科大学2006
- [8].Livin、Caspase-3在结直肠癌组织中的表达及意义[D]. 李日恒.吉林大学2007
- [9].“喹胺醇”药代动力学及非临床毒理学研究[D]. 李建喜.中国农业科学院2006
- [10].凋亡抑制基因Livin在食管癌中的表达及其与P53和Bcl-2表达、细胞增殖、凋亡相关性的研究[D]. 黄青远.中国医科大学2007