高压氧促进HIBD新生大鼠人神经干细胞移植疗效的实验研究

论文摘要

目的:通过经脑室移植人神经干细胞（human neural stemcells,hNSCs）配合高压氧（hyperbaric oxygenation,HBO）治疗,观察HBO对植入的hNSCs存活、迁移、分化的影响。方法:利用7日龄（d7）Wistar大鼠采用Rice法复制HIBD模型,并随机分为HIBD组（n=20）、移植组（n=24）、HBO组（n=20）和移植+HBO组（n=24）。利用体外培养的方法制备hNSCs单细胞悬液,d10时采用侧脑室微量注射法进行hNSCs移植,于移植后15分钟内开始HBO治疗,每日1次,连续10d。于d11,d12,d13,d20时利用原位缺口末端染色法（TUNEL法）进行皮质和海马区凋亡细胞计数。d20行病理检查,并应用免疫荧光组化染色法检测移植组和移植+HBO组植入细胞存活、迁移、分化情况。结果:1.胎儿脑组织体外培养12天可获得hNSCs球,免疫荧光标记显示为Nestin阳性细胞,经诱导分化后NF、GFAP染色呈阳性,提示其具有NSCs特性。2.TUNEL阳性细胞计数:d11时各组大鼠脑组织皮层和海马区均可检测到凋亡细胞,与HIBD组比较,HBO组TUNEL阳性细胞数的差异不具有显著性,而移植组和移植+HBO组的TUNEL阳性细胞减少,差异具有显著性（均P＜0.01）;移植组和移植+HBO组两组间比较差异也具有显著性（P＜0.01）。d20时,与HIBD组比较,HBO组、移植组和移植+HBO组的TUNEL阳性细胞减少,差异均具有显著性（均P＜0.01）,移植组和移植+HBO组两组间比较差异也具有显著性（P＜0.01）。3.d20时免疫荧光染色结果显示植入细胞从侧脑室向周围脑实质广泛迁移,分布在脑室旁、脑白质通路、丘脑、皮层及海马等处,在迁移方式与分布上,移植组和移植+HBO组无明显差异,但移植+HBO组植入细胞的存活数量高于移植组,其差异具有显著性（P＜0.01）;两组均可检测到hNSCs分化形成的神经元和星形胶质细胞和未分化的hNSCs,细胞形态与宿主细胞相似。结论:（1）来源于人的胎脑NSCs移植至HIBD新生鼠脑后,植入细胞能存活、迁移并可分化为神经元及星型胶质细胞。（2）hNSCs移植对HIBD大鼠受损脑组织有保护和修复作用。（3）HBO治疗可通过促进植入细胞的存活、迁移和分化而增强NSCs移植的上述保护作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英文对照缩略语词表
• 第一部分 建立新生大鼠HIBD模型
• 1.1 前言
• 1.2 实验动物及试剂设备
• 1.3 实验方法
• 1.4 实验结果
• 1.5 讨论
• 第一部分附图
• 第二部分 人胎脑NSCs体外扩增培养
• 2.1 前言
• 2.2 实验试剂和设备
• 2.3 实验方法
• 2.4 实验结果
• 2.5 讨论
• 第二部分附图
• 第三部分 hNSCs移植联合HBO治疗新生大鼠缺血缺氧性脑损伤
• 3.1 前言
• 3.2 实验动物及试剂设备
• 3.3 实验方法
• 3.4 结果
• 3.5 讨论
• 第三部分附图
• 结论
• 参考文献
• 综述 神经干细胞移植途径的研究进展
• 致谢
• 攻读学位期间主要成果