论文题目: 寻常型银屑病与IL-20、IL-20受体、IL-15相关性的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 免疫学
作者: 张庆瑞
导师: 姜奕
关键词: 银屑病,基因,遗传学
文献来源: 中国医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的寻常型银屑病（PV）是一种常见的病因不明的炎性增生性皮肤病,皮损变化早期表现有以巨嗜细胞和T细胞为主的炎细胞浸润。激活的T细胞释放的细胞因子可直接或间接调节角朊细胞的分化、生长和功能。IL-20和IL-15主要由外周血单个核细胞和角质形成细胞分泌产生。用多种不同组织特异性启动子将人或鼠的IL-20基因转入小鼠体内均能使转基因鼠的IL-20表达增高,且与银屑病患者的皮肤病理改变极为相似。IL-20的高表达可能改变了表皮细胞、淋巴细胞和角质形成细胞之间的相互作用,导致角质形成细胞增生和分化失调。通过对银屑病患者皮损中IL-20和IL-15表达相关性的研究,可以进一步证实IL-20和IL-15在银屑病发病过程中所起的作用。材料和方法一、研究对象:收集我院2003至2005年寻常型银屑病35例,并经临床及病理证实。其中男21例,女14例,平均年龄38.3（17-55）岁。正常皮肤20例（为急性外伤手术病例）,男12例,女8例,平均年龄44.8（22-60）岁。于局麻下取病损活组织,深达皮下。所有标本经10%福尔马林液固定,石蜡包埋,切片。二、原位杂交检测1.操作步骤（1）玻片的处理:洗液浸泡后,用水洗净、晾干,经高温、高压灭菌。采用多聚赖氨酸处理,将载玻片于PLL工作液中上下蘸几下,分开竖立于玻片架上,室温晾干,4℃保存备用。（2）切片制备:常规脱水、浸蜡、包埋。厚度6μm,连续切片。（3）切片常规脱蜡至水,用新鲜配制的3%H2O2室温处理10min,以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗涤3min×3次。（4）暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶（1ml柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀）,37℃消化15min。0.5mol/LPBS洗5min×3次,蒸馏水洗5min×1次。（5）预杂交:按每张切片加20μl预杂交液,湿盒中于恒温箱38℃4h。吸取多余液体,不洗。（6）杂交:按每张切片加20μl杂交液,将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开,盖在切片上,恒温箱42℃杂交过夜。（7）杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5min×2次;0.5×SSC 15min×1次;0.2×SSC 15min×2次。（8）滴加封闭液:37℃30min。甩去多余液体,不洗。（9）滴加生物素化鼠抗地高辛:37℃60min。0.5 mol/L PBS洗5min×4次。（10）滴加链霉亲合素生物素复合体（SABE）:37℃20min。0.5 mol/LPBS洗5min×3次。（11）滴加生物素化过氧化物酶:37℃20min。0.5 mol/L PBS洗5rain×4次。（12）DAB显色:室温20～30min。用蒸馏水充分洗涤,苏木素复染,充分水洗。（13）酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。2.质量控制（1）设立阳性和阴性对照:阳性对照:由公司提供;阴性对照:为同一标本的切片省略探针。（2）操作中严格防止RNA酶的污染。结果一、阳性对照:细胞胞浆明显棕色着色。二、阴性对照:均无胞浆特异性染色出现。三、标本检测结果:（一）IL-20 mRNA在正常皮肤和寻常型银屑病组织中表达1.IL-20 mRNA在银屑病皮损角质形成细胞中呈较强阳性～强阳性（++～+++）表达,主要在表皮基底层形成细胞胞浆阳性着色,阳性率为100%,其中强阳性为62.8%（22/35）、较强阳性为34.3%（12/35）、阳性为2.8%（1/35）（见表1）。2.在正常皮肤组织中,IL-20 mRNA在表皮基底层无阳性着色的18例,有阳性着色的2例,阳性率为10.0%,且呈（-～+）。经t检验,二组间有显著性差异。3.在正常皮肤和寻常型银屑病皮肤组织中IL-20 mRNA表达线性密度的比较:在寻常型银屑病皮肤组织IL-20 mRNA表达线性密度为13.502±9.613,明显高于IL-20 mRNA在正常皮肤组织中的表达（1.512±1.503）,差异有统计学意义。（二）IL-20R mRNA在正常皮肤和寻常型银屑病组织中表达1.IL-20受体mRNA在银屑病皮损角质形成细胞中呈较强阳性～强阳性（++～+++）表达,主要在表皮基底层形成细胞胞浆阳性着色,其中强阳性为55.6%（19/35）、较强阳性为47.3%（16/35）（见表2）。2.在正常皮肤组织中,IL-20受体mRNA在表皮基底层无阳性着色的18例,有阳性着色的2例,阳性率为10.0%,且呈（-～+）。经t检验,二组间有显著性差异。3.在正常皮肤和寻常型银屑病皮肤组织中IL-20R mRNA表达线性密度的比较:在寻常型银屑病皮肤组织IL-20R mRNA表达线性密度为11.540±8.493,高于IL-20R mRNA在正常皮肤组织中的表达（1.362±1.406）,差异有统计学意义。（三）IL-15 mRNA在正常皮肤和寻常型银屑病组织中表达1.在正常皮肤组织中,IL-15 mRNA在表皮基底层无阳性着色的17例,有阳性着色的3例,阳性率为15.0%,且呈（-～+）。2.在寻常型银屑病皮肤组织中,IL-15 mRNA主要在表皮基底层形成细胞胞浆阳性着色,阳性率为100%,且大部分呈（++～+++）。其中强阳性为57.1%（20/35）、较强阳性为31.4%（11/35）、阳性为11.4%（4/35）（见表3）。经t检验,二组间有显著性差异。3.在正常皮肤和寻常型银屑病皮肤组织中IL-15 mRNA表达线性密度的比较:线性密度用阳性细胞数/mm表示,在寻常型银屑病皮肤组织IL-15 mRNA表达线性密度为9.512±6.503,高于IL-15 mRNA在正常皮肤组织中的表达（1.339±1.011）,差异有统计学意义。结论通过系列研究,首次证明中国北方寻常型银屑病与IL-15、IL-20及IL-20受体的基因表达密切相关,以此证明IL-15、IL-20在银屑病的发病过程中具有重要作用,为选择运用IL-15、IL-20的拮抗剂治疗银屑病提供理论依据。
论文目录:
中文论著摘要
英文论著摘要
英文缩略语
论文一 寻常型银屑病与IL-20相关性研究
前言
材料与方法
实验结果(附论文图片)
讨论
结论
本研究创新性自我评价
论文二 寻常型银屑病与IL-20受体相关性的研究
前言
材料与方法
实验结果(附论文图片)
讨论
结论
本研究创新点自我评价
论文三 寻常型银屑病与IL-15相关性的研究
前言
实验材料与方法
实验结果(附论文图片)
讨论
结论
本研究创新性自我评价
参考文献
综述
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发布时间: 2010-04-14
参考文献
- [1].北方汉族寻常型银屑病与HLA-A、B、Cw、DR、DQ等位基因及血清瘦素相关性研究[D]. 王岩.中国医科大学2005
- [2].维A酸受体在寻常型银屑病患者体内表达水平及其意义的研究[D]. 冯素英.中国协和医科大学2002
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- [5].天疱疮、大疱性类天疱疮和寻常型银屑病与I型单纯疱疹病毒、人类疱疹病毒8的相关性研究[D]. 王官清.中国医科大学2001
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