论文摘要
单增李斯特菌是自然界中一种常见的致病菌,能感染人类和动物;李斯特菌病是具有高致死率的一种疾病。因此,采用科学的方法检测食品中是否含有单增李斯特菌就显得非常重要。本文利用IMS-PCR法能快速、简便地从食品中检测出单增李斯特菌。免疫磁珠法(Immunomagnetic Separation简称IMS法或Listertest法)是利用抗原抗体反应的原理,做单增李斯特菌的特异性和敏感性实验;PCR(Polymerase Chain Reaction)法是针对单增李斯特菌的iap基因(编码p60蛋白)设计特异性引物,进行PCR扩增反应;做单增李斯特菌的特异性和敏感性实验。通过对这两种方法的分析和比较,建立IMS-PCR法,利用PCR法的引物,做单增李斯特菌的特异性和敏感性实验。同时,国标法(检测的标准方法)和实时荧光定量PCR法(试剂盒)作为IMS-PCR法的对照,同IMS-PCR法实验结果进行分析和比较。IMS法:能快速捕集细菌,在培养液中进行增菌(37℃14~18h);通过溶血反应和鼠李糖反应确认是否为单增李斯特菌,需要3~7天,敏感性能达到10-7。PCR法:从食品中获取单增李斯特菌到进行增菌培养要3~5天,提取细菌基因组DNA,并对其进行了PCR扩增,结果得到片段的长度为230bp,需要4h就得出结果,敏感性能达到10-5。IMS-PCR法:从快速捕集细菌到进行增菌培养,再经PCR扩增后得到片段长度为230bp;只需在1天内就能检测出单增李斯特菌,缩短了检测的时间;同时提高单增李斯特菌检测的特异性和敏感性。IMS-PCR法的实验结果与国标法和实时荧光定量PCR法(试剂盒)法的结果相符,然而它比国标法简便、快速、灵敏度高,比实时定量PCR(试剂盒)法价格低;因此从经济和实用性上,IMS-PCR法有很好的应用前景和研究价值。
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标签:单核细胞增生李斯特菌论文; 国标法论文; 免疫磁分离论文; 模板论文; 实时荧光定量论文;