利用多重荧光定量PCR产前快速诊断胎儿非整倍体的研究

论文摘要

将PCR技术运用在产前诊断领域迄今已近20年了,随着技术的推广和使用范围的增加,其有效性及高效性逐步获得大家的认同,甚至有取代细胞学核型分析的趋势。通常,PCR可在获取羊水、绒毛或胎儿组织标本后的24-36小时即获得诊断报告,若胎儿正常可缓解孕妇及家庭的焦虑,若胎儿有染色体异常可即时终止。国内也有较多学者从事使用PCR产前诊断胎儿非整体的研究,但在STR位点的选择及使用数目等方面的研究却不多,本文从STR新位点在正常无关个体外周血中的杂合度及多肽信息含量入手,建立STR-PCR的实验方法。使用多种STR位点组合在13、18、21号染色体异常的标本中探索有效的组合方式,最后,设计两种探针组合在产前孕中期羊水中检测21号染色体的数目,并和细胞核型学分析结果比较,计算STR-PCR方法在产前诊断中的检出率,为临床进行多种新研究建立可行的方法学平台。第一部分多重荧光STR新位点在50例无关个体中的研究目的应用13、18、21号染色体上17个STR新位点（D13S796、D13S800、D13S886、D18S877、D18S851、D18S847、D18S819、D21S11L、D21S1409、D21S1809、D21S2052、D21S1994、D21S1446、D21S1435、D21S11、、D21S1432、D21S1442）,了解新位点在诊断染色体数目中的应用价值。方法在50例正常人血清标本中通过PCR扩增基因测序的方法,用SPSS12.0软件直接计算新位点杂合度（Ⅱ）和多肽信息含量（PIC）,并对13、18、21染色体数目进行诊断。结果13号染色体中STR位点H0.6-0.74,PIC 0.65-0.7。18号染色体中STR位点H 0.69-0.81,PIC 0.68-0.8。21号染色体中STR位点110.7-0.87,PIC0.63-0.84。21、13、18染色体,二倍体检出率为100%。结论STR新位点杂合度和信息含量高,可在诊断13、18、21染色体数目中被应用。第二部分STR新位点在13、18、21三体综合征中的研究目的使用不同STR位点组合在常见染色体三体中进行检测,研究组合数对检出率的影响。方法在20例常见染色体三体异常标本中,应用不同STR位点数目组合,利用STR-PCR计算峰面积比值判断染色体数目的方法比较检出率。结果在21-三体中STR位点两两组合检出率最高达87.5%,三个组合检出率最高达86.7%,四个组合最高达93.75%,五个以上组合检出率达100%。结论使用STR-PCR的方法可检测染色体数目异常。第三部分多重荧光定量PCR在产前诊断胎儿唐氏综合征中的应用目的应用多重荧光定量PCR的方法对孕中期羊水胎儿细胞进行唐氏综合征快速产前诊断。方法从孕中期羊水中提取胎儿DNA,通过多重荧光定量PCR使用STRs对13、18、21号染色体进行胎儿染色体非整倍体的筛查,筛查结果异常再进行21号染色体的快速诊断。进行PCR诊断的羊水标本同时使用“金标准”染色体核型分析法做比较。结果34例羊水标本中,2例标本严重母血污染未行PCR检测,1例标本PCR及染色体核型培养均失败,29例标本经PCR和核型分析诊断为正常染色体,2例标本经PCR和核型分析诊断为21-三体。检出率100%,假阴性率0。结论通过多重荧光定量PCR法诊断胎儿染色体非整倍体是临床进行快速产前诊断的有效方法之一。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 多重荧光STR新位点在50例无关个体中的研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 STR新位点在13、18、21三体综合征中的研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 多重荧光定量PCR在产前诊断胎儿唐氏综合征中的应用
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢