影响羟基磷灰石纳米颗粒DNA转染率因素的研究

论文摘要

目的：研究羟基磷灰石纳米颗粒介导DNA转染的影响因素。方法：观察聚乙烯亚胺（Polyethylenimine, PEI）等表面活性剂处理的羟基磷灰石纳米颗粒（nanoparticle hydroxyapatite,简称nHA）（以下简称PEI-nHA）混悬液在室温下的悬浮稳定性；用PEI-nHA与携带CX26基因的质粒DNA形成的复合物转染Hela细胞。在转染过程中,通过分别改变四个重要实验条件（PEI-nHA浓度、DNA量、细胞接种数量、共转染时间）的参数,观察基因转染效率的变化；不同的基因载体（未经修饰的nHA、PEI-nHA、PEI）与携带CX26基因的质粒DNA形成的复合物转染Hela细胞,观察转染效率。结果：PEI-nHA配置成不同浓度的混悬液在室温下静置24小时后观察,具有良好的悬浮稳定性。静置2个月后观察,浓度为≥1000μg/ml的PEI-nHA悬浮稳定性良好,浓度≤500μg/ml的可见分层。PEI-nHA转染质粒DNA研究结果：1) PEI-nHA最佳浓度为250μg/ml; 2)DNA最佳量为2μg; 3) Hela细胞接种按4×105计数较适宜；4)共转染最佳时间为6小时。未经修饰的nHA转染率在10%左右；PEI-nHA的转染率在28%左右；PEI的转染率在55%左右。结论：1.经PEI修饰后的nHA载体具有良好的分散性和悬浮稳定性；高浓度的PEI-nHA悬浮稳定性较低浓度的PEI-nHA悬浮稳定性好,提示液相PEI-nHA应以高浓度保存；2.PEI修饰nHA提高了nHA体外细胞转染率；3.PEI的转染率高于PEI-nHA.4.PEI-nHA的体外转染率为28%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 实验材料与方法
• 1.1 实验的试剂、材料、仪器
• 1.2 保存质粒的转化、抽提、测序、纯化
• 1.3 PEI-nHA的制备及性能的评估
• 1.4 细胞培养
• 1.5 细胞转染过程中各条件参数的优化
• 1.6 nHA、PEI-nHA和PEI转染Hela细胞
• 1.7 统计方法
• 第二章 实验结果
• 2.1 质粒DNA的双酶切鉴定、测序
• 2.2 PEI-nHA颗粒混悬液的悬浮稳定性及DNA结合实验
• 2.3 细胞转染过程中各条件参数的优化
• 2.4 nHA、PEI-nHA和PEI转染Hela细胞
• 第三章 讨论
• nHA颗粒毒性及悬浮稳定性'>3.1 PEI_nHA颗粒毒性及悬浮稳定性
• 3.2 纳米基因载体的靶向性
• 3.3 转染过程中的各种影响因素
• 3.4 PEI-nHA基因载体与PEI基因载体的比较
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果