论文摘要
鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）血清型众多，不同血清型之间交叉反应小或不具有交叉反应性，因此世界各国均选择与本地区流行血清型相匹配的毒株进行鸡传染性支气管炎（Infectious Bronchitis，IB）弱毒疫苗的研制。我国目前至少存在3种血清型的IBV，即Mass型，LX4型以及tl／CH／LDT3／03型，但现有的商品化疫苗不能对现地流行毒株提供有效的保护作用，导致IB在我国免疫鸡群中流行和传播。因此IB新弱毒疫苗的研制，对于预防和控制我国IB的发生和流行具有重要意义。本研究以tl／CH／LDT3／03毒株为研究对象，通过SPF鸡胚连续传代致弱，以期制备一株IB弱毒疫苗的候选毒株。每个代次毒经尿囊腔接种3枚9～11日龄的SPF鸡胚，37℃孵育，每日观察鸡胚两次。72h后观察鸡胚病变情况，无菌收集鸡胚尿囊液，并选择72h未死，但病变典型，尿囊液清亮的鸡胚进行下一次传代。根据鸡胚死亡时间及病变情况确定是否进行稀释及稀释倍数，一般稀释10-1～10-4。tl／CH／LDT3／03毒株在SPF鸡胚传代过程中，病毒滴度较高，接种鸡胚病变典型，毒株高度适应鸡胚。与之相反，其对SPF雏鸡的致病力随鸡胚传代次数的增加而逐渐降低。tl／CH／LDT3／03第3代病毒（P3）对雏鸡的发病率和死亡率分别高达100％和80％；而当tl／CH／LDT3／03第120代病毒（P120）接种SPF雏鸡后，无临诊发病症状，表明tl／CH／LDT3／03毒株在SPF鸡胚上传至P120时已经充分致弱。本研究通过免疫鸡血清抗体变化情况、攻毒后临诊症状观察以及气管和肾脏的保护效果三个方面对弱毒株tl／CH／LDT3／03 P120的免疫效力进行初步评价。结果显示，tl／CH／LDT3／03 P120接种雏鸡后20天，抗体阳性率为100％，而对照组鸡血清抗体均为阴性，tl／CH／LDT3／03 P120可诱导良好的体液免疫应答；使用同源强毒tl／CH／LDT3／03 P3攻击后，免疫组雏鸡无发病症状，而对照组雏鸡表现明显的呼吸道症状，且在攻毒后第4天有2只鸡死亡，第5天有4只鸡死亡，初步表明tl／CH／LDT3／03 P120弱毒株可对同源强毒提供有效的保护作用；对攻毒后5天的雏鸡气管和肾脏进行病毒分离发现，tl／CH／LDT3／03 P120可对70.1％的雏鸡气管和肾脏提供保护，这可能分别与病毒诱导的粘膜免疫及IB特异性循环抗体有关。综上所述，弱毒株tl／CH／LDT3／03 P120具有良好的免疫原性，可对雏鸡提供较好的免疫保护作用，是理想的疫苗培育候选毒。IBV S1蛋白能诱导机体产生病毒中和抗体、血凝抑制抗体，在病毒致病性和组织嗜性等方面均具有重要作用，因此目前对于IBV致病力的研究主要集中于S1基因。为了分析IBV tl／CH／LDT3／03毒株致病力变化与S1基因核苷酸及推导氨基酸序列的相关性，本研究对tl／CH／LDT3／03 P3毒株及P120毒株的S1基因序列进行了比较，发现传代后有两个核苷酸发生变异（361位和656位），并导致第121位氨基酸残基由G突变为W，第219位氨基酸残基由Q突变为R，其中第121位氨基酸残基位于S1基因高变区内。S1蛋白两个氨基酸的变异是否和IBV tl／CH／LDT3／03致病力的下降具有相关性，还有待进一步研究。
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标签：鸡传染性支气管炎病毒论文; 弱毒疫苗论文; 基因论文;