菟丝子提取物对1-甲基-4-苯基吡啶（MPP～+）诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

论文摘要

以神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶（MPP+）诱导PC12细胞凋亡建立帕金森病（PD）体外细胞模型。在MPP+应用早期,借助流式细胞仪分析发现p53表达量增加,Bcl-2表达量减少,Bax蛋白表达量升高,Bcl-2/Bax蛋白比率下降。符合线粒体凋亡通路的特征。在室温下,用甲醇渗漉菟丝子种子的干粉七天,提取液经减压蒸干后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。滤液经减压蒸馏浓缩至浸膏,加水分散后再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取,收集各部分。减压蒸干后,以细胞活性分析为指导,对乙酸乙酯相萃取物用硅胶柱和聚酰氨柱进一步分离纯化。利用MPP+诱导的PC12细胞损伤模型,筛选菟丝子中具有保护作用的活性成分。通过细胞活力分析发现菟丝子提取物能抑制PC12细胞损伤。通过形态观察、荧光染色分析证实菟丝子提取物能够抑制细胞凋亡。流式细胞仪定量分析发现细胞凋亡的比率由31. 9±2. 8%降低到6. 3±0. 16%,p53表达量降低,Bcl-2表达量增加,Bax蛋白表达量减少,Bcl-2/Bax蛋白比率升高。可能是因为减少线粒体细胞色素C释放到细胞液中及拮抗半胱氨酸酶-3的激活,最终抑制PC12细胞凋亡。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 1. 1 研究背景
• 1. 2 选题依据
• 1. 3 实验方案
• 1. 4 研究目的及意义
• 2 文献综述
• 2. 1 凋亡通路调节机制
• 2. 1. 1 凋亡通路
• 2. 1. 2 线粒体介导的凋亡通路
• 2. 1. 2. 1 Bcl-2家族蛋白
• 2. 1. 2. 2 线粒体通透性转变孔
• 2. 1. 2. 3 线粒体释放促凋亡蛋白
• 2. 1. 3 Caspase与细胞凋亡
• 2. 1. 3. 1 Caspase-3的活化与细胞凋亡
• 2. 1. 3. 2 Caspase-3的底物
• 2. 2 细胞凋亡与帕金森疾病
• 2. 3 帕金森疾病细胞及动物模型研究进展
• 2. 4 中药菟丝子的研究进展
• 2. 4. 1 菟丝子的自然状况
• 2. 4. 2 菟丝子的化学成分
• 2. 4. 3 菟丝子的药理作用
• +诱导的PC12细胞凋亡模型'>3. MPP⁺诱导的PC12细胞凋亡模型
• 3. 1 实验材料与设备
• 3. 1. 1 实验材料
• 3. 1. 2 实验设备
• 3. 2实验方法
• 3. 2. 1 PC12细胞培养
• +对PC12细胞的损伤'>3. 2. 2 MPP⁺对PC12细胞的损伤
• 3. 2. 3 Hoechst 33258染色观察细胞形态变化
• 3. 2. 4 流式细胞仪分析细胞凋亡比率
• 3. 2. 5 流式细胞仪分析p53、 Bcl-2和Bax蛋白
• 3. 3 实验结果
• +引起PC12细胞损伤的时间和剂量关系'>3. 3. 1 MPP⁺引起PC12细胞损伤的时间和剂量关系
• 3. 3. 2 Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡
• 3. 3. 3 流式细胞仪分析PC12细胞凋亡比率
• +对P53蛋白的影响'>3. 3. 4 MPP⁺对P53蛋白的影响
• +对Bcl-2家族蛋白的影响'>3. 3. 5 MPP⁺对Bcl-2家族蛋白的影响
• 3. 4 讨论
• 3. 5 小结
• 4. 菟丝子提取物抑制PC12细胞凋亡的作用机制
• 4. 1 实验材料及设备
• 4. 1. 1 实验材料
• 4. 1. 2 实验设备
• 4. 2 实验方法
• 4. 2. 1 菟丝子提取物制备
• 4. 2. 2 PC12细胞培养
• 4. 2. 3 菟丝子提取物对PC12细胞的毒性分析
• +诱导的PC12细胞损伤的作用'>4. 2. 4 菟丝子提取物对MPP⁺诱导的PC12细胞损伤的作用
• 4. 2. 5 细胞形态学的观察
• 4. 2. 6 流式细胞仪分析细胞凋亡比率
• 4. 2. 7 流式细胞仪分析p53、 Bcl-2和Bax蛋白
• 4. 3 实验结果
• 4. 3. 1 菟丝子萃取物对PC12细胞的毒性作用
• +诱导的PC12细胞损伤的保护作用'>4. 3. 2 菟丝子萃取物对MPP⁺诱导的PC12细胞损伤的保护作用
• 4. 3. 3 菟丝子提取物制备
• +诱导的PC12细胞损伤的保护'>4. 3. 4 菟丝子提取物对MPP⁺诱导的PC12细胞损伤的保护
• 4. 3. 5 Hoechst 33258染色法观察PC12细胞形态变化
• 4. 3. 6 流式细胞仪分析细胞凋亡比率
• 4. 3. 6 菟丝子提取物对P53蛋白的影响
• 4. 3. 7 菟丝子提取物对Bcl-2家族蛋白的影响
• 4. 4 讨论
• 4. 5 小结
• 5. 结论与创新
• 发表论文
• 致谢