红参酸性多糖和匹多莫德的免疫调节协同作用研究

论文摘要

中西药联用是目前临床的常用形式,但仍存在剂量配比不清楚和卫生经济学结论缺乏等一些现实问题。大多数的临床报道是中西药配伍和西药的疗效对比,很少涉及中西药单用和中西药联用三者之间的疗效对比,更缺乏不同治疗方案的药理学对比研究,使中西药联用的理论依据明显不足。本实验以环磷酰胺为工具药物建立小鼠免疫低下模型,运用生物统计方法,考察了红参酸性多糖（RGAP）和匹多莫德合用的免疫调节治疗效果,为中西药结合提供理论和实践基础。本文首先考察了RGAP和匹多莫德对免疫低下小鼠的免疫细胞功能及某些免疫分子含量的影响。两药单独或合并使用时,小鼠脾细胞中T细胞的繁殖增生能力和NK细胞的吞噬能力显著增强,腹腔巨噬细胞诱导产生的NO含量明显提高;而只有合并用药时,小鼠脾细胞中B细胞的繁殖增生能力显著增强。环磷酰胺造成小鼠血清中IL-2、IL-12、IFN-γ及CRP的含量下降;匹多莫德可提高IL-2水平,RGAP可提高CRP水平,两药合并使用可明显提高IL-12及IFN-γ水平。以上结果提示,RGAP和匹多莫德可以通过增强免疫细胞增生能力及活力,促进释放免疫调节因子,以达到提高细胞免疫水平的功效。论文进一步应用胸腺依赖性抗原绵羊红细胞（SRBC）及非胸腺依赖性抗原脂多糖（LPS）,考察了RGAP和匹多莫德对体液免疫的影响。甲胺蝶呤使小鼠体重及免疫器官重量明显下降,并且损害了LPS诱导B细胞生成抗体的能力,小鼠脾细胞抗体形成细胞（PFC）和血清中IgM生成全部显著下降。RGAP单独用药或与匹多莫德合并用药可以显著增加血清IgM的含量;而只有两药合并才能提高脾细胞PFC数目。RGAP与匹多莫德合并用药可以显著缓解环磷酰胺造成的白细胞降低和脾细胞减少,增强SRBC引起的初次免疫应答（PFC）及二次免疫应答（IgG）。为同时检测可能存在的潜在毒性,进行了血液生化学及免疫器官病理切片检查:结果表明两药合并用药并未引起肝、肾毒性,病理切片也未见任何异常。以上从细胞免疫和体液免疫两个方面考察了匹多莫德与RGAP对免疫低下小鼠的免疫调节作用。本论文的第三章着重考察了两药对巨噬细胞功能的影响,从巨噬细胞在非特异性免疫和特异性免疫两方面中的作用进行了考证。结果表明:匹多莫德和RGAP合并用药可以拮抗环磷酰胺造成的巨噬细胞能力下降,提高巨噬细胞的胞吞和吞噬能力,提高超氧阴离子生成量;iNOS基因表达升高,促进NO的生成;升高细胞表面的协同刺激分子CD80和CD86的表达量,增强其抗原提呈能力。综上所述,匹多莫德和RGAP通过改善细胞免疫及体液免疫,加强巨噬细胞在非特异性免疫和特异性免疫中的功能,达到了协同提高免疫的良好效果。

论文目录

• 目录
• 摘要
• ABSTRACT
• 序言
• 一.红参酸性多糖概述
• 二.匹多莫德概述
• 三.中西药学结合——立题依据
• 第一章 合用红参酸性多糖与匹多莫德对细胞免疫调节的协同作用
• 一.前言
• 二.实验材料
• 三.实验方法
• 3.1 环磷酰胺致小鼠免疫低下模型的建立方法
• 3.2 小鼠腹腔巨噬细胞的体外培养方法
• 3.3 LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的测定及细胞成活率的测定方法
• 3.4 小鼠脾脏细胞的体外培养方法
• 3.5 小鼠脾脏T细胞和B细胞增殖能力的测定方法
• 3.6 YAC-1细胞的复苏和培养
• 3.7 小鼠脾脏NK细胞活力的测定方法
• 3.8 细胞因子IL-2,IL-12,IFN-γ及CRP的测定方法
• 3.9 数据统计方法
• 四.实验结果
• 4.1 对环磷酰胺致免疫低下小鼠的体重及免疫脏器的重量的影响
• 4.2 对LPS刺激环磷酰胺致免疫低下小鼠的腹腔巨噬细胞NO生成和细胞成活率的影响
• 4.3 对环磷酰胺致免疫低下小鼠的脾脏T细胞和B细胞增殖能力的影响
• 4.4 对环磷酰胺致免疫低下小鼠的脾脏NK细胞活力的影响
• 4.5 对环磷酰胺致免疫低下小鼠的血清细胞因子IL-12,IFN-γ及CRP的影响
• 五.讨论与小结
• 1.匹多莫德和RGAP对免疫细胞的影响
• 2.匹多莫德和RGAP对免疫因子的影响
• 3.药物联合作用评价方法
• 第二章 合用红参酸性多糖与匹多莫德对体液免疫的协同作用及毒性作用考察
• 一.前言
• 二.实验材料
• 三.实验方法
• 3.1 TI-Ag诱发小鼠抗原生成方法
• 3.2 TD-Ag诱发小鼠抗原生成方法
• 3.3 LPS coated-SRBC（L-SRBC）的制备方法
• 3.4 TI-Ag诱发小鼠脾脏细胞PFC的测定方法
• 3.5 TD-Ag诱发小鼠脾脏细胞PFC的测定方法
• 3.6 血清IgM,IgG及IgE测定方法
• 3.7 血清GTP的测定方法
• 3.8 血清Creatinine的测定方法
• 3.9 血清ALP的测定方法
• 3.10 小鼠脾脏、胸腺及淋巴结的病理切片制作方法
• 3.11 数据统计方法
• 四.实验结果
• 4.1 对MTX致免疫低下小鼠体重和免疫脏器的相对重量及脾脏细胞数目的影响
• 4.2 对LPS诱发MTX致免疫低下小鼠脾脏PFC及血清IgM的影响
• 4.3 对环磷酰胺致免疫低下小鼠体重和免疫脏器的相对重量的影响
• 4.4 对环磷酰胺致免疫低下小鼠WBC和脾脏细胞数的影响
• 4.5 对第一次注射SRBC诱发环磷酰胺致免疫低下小鼠脾脏PFC的影响
• 4.6 对第二次注射SRBC诱发环磷酰胺致免疫低下小鼠血清IgG和IgE的影响
• 4.7 对小鼠血清谷丙转氨酶、碱性磷酸酶和肌酐酸含量的影响
• 4.8 对小鼠主要免疫器官的毒性作用考察
• 五.讨论与小结
• 1.匹多莫德和RGAP对TI-Ag诱导的体液免疫反应的影响
• 2.匹多莫德和RGAP对TD-Ag诱导的体液免疫反应的影响
• 3.RGAP的吸收及免疫调节作用实验可能引起的毒性作用考察
• 第三章 合用红参酸性多糖与匹多莫德对腹腔巨噬细胞功能的免疫调节作用
• 一.前言
• 二.实验材料
• 三.实验方法
• 3.1 环磷酰胺致小鼠免疫低下模型的建立方法
• 3.2 小鼠腹腔巨噬细胞的体外培养方法
• 3.3 小鼠腹腔巨噬细胞胞吞能力测定方法
• 3.4 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力测定方法
• 3.5 小鼠腹腔巨噬细胞超氧阴离子生成测定方法
• 3.6 小鼠腹腔巨噬细胞iNOS基因的RT-PCR测定方法
• 3.7 小鼠腹腔巨噬细胞表面协同刺激分子CD80和CD86测定方法
• 3.8 数据统计方法
• 四.实验结果
• 4.1 对环磷酰胺致免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞胞饮作用的影响
• 4.2 对环磷酰胺致免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响
• 4.3 对环磷酰胺致免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞超氧阴离子生成的影响
• 4.4 对环磷酰胺致免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞iNOS基因表达的影响
• 4.5 对环磷酰胺致免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞表面CD80和CD86的影响
• 五.讨论与小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• Abbreviation
• 发表论文与参加会议
• 个人简历
• 附件