论文摘要
目的：探讨转座子在耐多药产ESBLs酶大肠埃希菌中的分布及耐药相关性。方法：1.初筛试验：根据美国国家临床实验室标准委员会（TheNational Committee for clinical Laboratory Standards, NCCLS）推荐的纸片扩散法（kerby-Bauer纸片扩散法）[1]检测71株大肠埃希菌中头孢噻肟（CTX）、头孢他啶（CAZ）、头孢曲松（CS）、氨曲南（AZT）的耐药性,即抑菌环直径≤22 mm的为头孢他啶；抑菌环直径≤25mm的为头孢曲松；抑菌环直径≤27 mm的为氨曲南或头孢噻肟；所符合以上标准的定为初筛可疑产ESBLs菌株。2.纸片确认试（Confirmatory tests）[2]:对纸片扩散法所得可疑ESBLs菌株,同时进行药敏试验,每一组药物中加入头孢他啶加克拉维酸和头孢他啶、头孢噻肟加克拉维酸和头孢噻肟,观察在加克拉维酸前后的抑菌环直径变化≥5mm可确认为产ESBLs菌株。3.药敏试验：采用NCCLS推荐的纸片扩散法（Kerby-Bauer法,K-B法）[3],首先采用对大肠埃希菌标准菌株ATCC 25922进行质控,再对选定的三类中共6种常用抗菌药物：头孢噻肟（CTX）、链霉素（S）、阿米卡星（A）、左氧氟沙星（LEV）、环丙沙星（CIP）、头孢西丁（FOX）在71株大肠埃希菌耐药性分别进行测定。4.PCR技术：大肠埃希菌的DNA,采用Biospin细菌基因组DNA试剂盒所提取。根据已知的转座子Tn21、Tn501、Tn1、Tn2、Tn3、Tn1000、Tn1548分别设计七对引物,在所得到转座子遗传标记物为阳性的菌株中以大肠埃希菌DNA为反应模板分别进行PCR扩增,阳性扩增长度分别为：Tn21为317 bp; Tn501为373 bp；Tnl为497bp；Tn2为479bp；Tn3为323bp；Tn1000为372bp；Tn1548为497bp；将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳、紫外线检测仪观察结果。5.基因测序：分别提取所测转座子DNA扩增阳性的菌株的PCR扩增产物用核酸定量仪测得DNA浓度>300ug/ml,并送至上海生工生物技术公司进行基因测序[4]。结果：1.产ESBLs菌株：在71株大肠埃希菌中通过纸片法初筛后再行确认试验,共检出产ESBLs34株（49.30%）。2.药敏结果：6种抗生素的敏感性在71株大肠埃希菌中全部分布为：耐多药45株（63.38%）、双耐8株（11.27%）、单耐11株（15.49%）、全敏感7株（9.86%）。3.转座子的检出情况：71株细菌中含转座子Tn21、转座子Tn501阳性菌共15株,转座子Tnl、Tn2、Tn3、Tn1000、Tn1548均未检出。3.1转座子在不同耐药模式中的分布：45株耐多药菌株含耐多药转座子菌株13株（28.89%）,8株双耐药菌株含转座子双耐药菌株1株（12.50%）,11株单耐药菌株含转座子单耐药菌株1株（9.09%）,7株敏感耐药模式中未检出。整体比较CMH X2=4.56 p=0.032；耐多药与（双耐药+单耐药+全敏感）比较X2=4.44 p=0.0350。3.2转座子在产ESBLs酶菌株与非产ESBLs酶中的分布：35株产酶菌含转座子的14株（40%）,36株非产酶菌含转座子的4株（11.11%）；该组X2=10.372 p=0.001。3.3不同转座子模式在各种耐药模式中的分布：转座子Tn21检出7株,其中耐多药6株（85.71%）、双耐0株（0%）、单耐1株（12.5%）；转座子Tn501检出5株,耐多药4株（80%）；双耐1株（20%）Tn21与Tn501重叠3株（100%）,均为耐多药；3.4不同转座子模式在产ESBLs酶菌株与非产ESBLs酶中的分布：转座子Tn21检出7株,其中产ESBLs酶菌株7株（100%）,非产ESBLs酶0（O%）株；转座子Tn501检出5株,其中产ESBLs酶菌株1（20%）株,非产ESBLs酶4株（80%）；Tn21与Tn501重叠3株,其中产ESBLs酶菌株3株（100%）,非产ESBLs酶未检出；该组整体比较X2=10.909 p=0.004,转座子在产酶菌株中具有统计学意义。3.5转座子Tn21与Tn501分别在耐药模式中的分布：转座子Tn21检出10株中耐多药9株（90%）、单耐药1株（10%）、双耐药与全敏模式均为检出；转座子Tn501检出8株中耐多药7株（87.5%）、双耐药1株（12.5%）；全敏与单耐模式均未检出。3.6转座子Tn21与Tn501分别在ESBLs酶与非产ESBLs酶中的分布：转座子Tn21检出10株,产酶10（100%）株、非产酶0株；转座子Tn501检出8株,产酶4株（50%）、非产酶4株（50%）；精确概率法p=0.023具有统计学意义。结论：1.本地区经临床分离大肠埃希菌中的转座子主要以Tn21与Tn501形式存在,主要分布在耐多药埃希菌中。2.转座子菌株中在产酶与非产酶中均分布,尤其以产ESBLs酶的检出率大于非产ESBLs酶的检出率,提示转座子与ESBLs酶有相关性。3、转座子Tn21与Tn501可重叠存在见于耐多药大肠埃希菌。