Islet-l促C3H10Tl/2向心肌样细胞特化中基因上组蛋白乙酰化作用及相互关系研究

论文摘要

目的本课题组前期研究发现感染高表达Islet-1（Insulin geneenhancer binding protein-1，胰岛素增强结合因子）慢病毒载体的C3H10T1/2干细胞可被诱导向心肌样细胞特异性分化，心肌特异性蛋白基因Gata4，Nkx2.5，Mef2c表达增高。但Islet-1通过何种方式促使这些心肌特异性蛋白基因表达增高还不甚明了。本文将从表观遗传组蛋白乙酰化修饰的角度，来探讨Islet-1是否通过提高这些心肌特异性基因上组蛋白乙酰化的水平来促进其表达增加，以及心肌基因上组蛋白乙酰化水平的降低对与Islet-1的结合有无影响，最后综合分析明确Islet-1与心肌特异性基因上组蛋白乙酰化的相互关系。材料与方法用DMEM高糖培养基（含有10%胎牛血清）培养从液氮罐中复苏的C3H10T1/2细胞，5%的CO2，37℃孵箱中放置培育，C3H10T1/2细胞属于贴壁细胞，当细胞生长密度为80%左右时按1:3的比例及时传代。按Moi=20加入相对应量的病毒至细胞生长密度为60%的C3H10T1/2细胞，同时加入终浓度为8mg/L相对应量的Polybrene。就好的好的1.对细胞进行分组：①正常C3H10T1/2细胞组，②阴性对照组，即为空感染慢病毒载体的C3H10T1/2细胞组，③实验组，即为感染高表达Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞组。的小论文去新闻聚合器2.实验方法：很多好吃好吃可兑换好吃的空气和检测流程吃额外1)荧光定量聚合酶链反应（quantitative polymerrase chainreaction, Q-PCR）验证慢病毒载体感染后Islet-1基因的表达情况，各组细胞的乙酰化组蛋白H3的表达量采用western blot技术检测。Rt-PCR检测感染高表达Islet-1后心肌基因Gata4，Nkx2.5，Mef2c表达达高峰的时间点，并在此时间点利用染色质免疫沉淀（Chromatinimmunoprec-itation, ChIP）技术，以乙酰化组蛋白H3的CHIP级抗体免疫沉淀各组细胞中与其结合的DNA，比较各组细胞的表达情况。2)观察40umol/L,80umol/L,120umol/L，160umol/L浓度的EGCG（乙酰化酶抑制剂）对C3H10T1/2细胞生长情况的影响，Western blot验证不同浓度的EGCG对乙酰化的组蛋白H3表达情况的影响, Rt-PCR验证EGCG对心肌特异性基因抑制作用最强的时间点，采用染色质免疫共沉淀技术以Islet-1的CHIP级抗体免疫沉淀与其结合的DNA，比较各组的表达情况。很多好吃好吃可兑换好吃的空气和检测流程吃额外结果很多好吃好吃可兑换好吃的空气和检测流程吃额外1.Q-PCR结果显示，C3H10T1/2细胞感染Islet-1慢病毒载体后，Islet-1基因表达增高，Western blot结果显示实验组乙酰化组蛋白H3表达最高（P<0.05），与其余时间点相比较，心肌特异性蛋白基因在感染Islet-1慢病毒载体后两周时表达最高，染色质免疫共沉淀技术结果显示实验组与AcH3抗体结合的心肌特异性蛋白基因Gata4,Nkx2.5, Mef2c的DNA的量高于其他两组（P<0.05）。吃的空气和检测2.观察40umol/L,80umol/L,120umol/L，160umol/L浓度的EGCG对细胞生长状态的影响发现加入160umol/L浓度的EGCG后细胞全部死亡，故选取40umol/L,80umol/L,120umol/L浓度的EGCG进行试验。Western blot验证120umol/L浓度的EGCG对乙酰化的组蛋白H3表达抑制作用最强（P<0.05）。Q-PCR结果显示在加入EGCG3小时后对心肌基因抑制作用最强（P<0.05）。感染慢病毒载体1w后，Islet-1基因表达大量增高，两周后表达趋于稳定，染色质免疫共沉淀技术显示，较未加入EGCG的实验组相比，加入EGCG后实验组与Islet-1结合的心肌特异性蛋白基因Gata4，Nkx2.5，Mef2c的DNA表达量降低（P<0.05）。很多好吃好吃可兑换好吃的空气和检测流程吃额外额结论很多好吃好吃可兑换好吃的空气和检测流程吃额外1. Islet-1促C3H10T1/2细胞向心肌样细胞特化过程中对心肌相关基因上组蛋白的乙酰化具有促进作用。额度无恶测查重测测查重2.降低心肌相关基因上组蛋白乙酰化水平会影响其与Islet-1的结合。很多好吃好吃可兑换好吃的空气和检测流程吃额外的味道

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 Islet-1 对心肌特异蛋白基因上组蛋白乙酰化的促进作用研究
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二部分 Islet-1 与心肌特异性蛋白基因上组蛋白乙酰化水平的相互关系
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文及参加的学术交流