序贯中药凝胶的制备及其对实验性大鼠宫颈柱状上皮异位的病理形态学影响

论文摘要

由黄连、黄柏、乳香、没药、儿茶、冰片组成的中药处方是治疗患者宫颈柱状上皮异位（又称宫颈糜烂）经验方,在临床使用多年且疗效显著。此中药处方在使用过程中,要求患者对中药处方先进行煎煮,应用其水煎液对阴道冲洗,以到达治愈宫颈糜烂的效果。由于使用过程繁琐,使得患者用药依从性下降,影响疗效。利用现代药剂学技术将此中药处方制成合适的制剂,既方便患者给药,又规范传统中药制剂,本研究即以此目的,开展初步研究。黄连、黄柏的有效成分为生物碱类物质,儿茶中含有鞣质,鞣质与生物碱会发生化学反应生成鞣质生物碱沉淀,为避免儿茶的加入降低黄连、黄柏有效成分的提取,本研究将黄连、黄柏、乳香、没药、冰片组方（简称治糜组方）,制成治糜温度敏感型阴道凝胶（简称治糜温敏凝胶）,将儿茶制成儿茶凝胶,并对两凝胶序贯治疗效果进行药理学评价。黄连、黄柏在此治糜组方中起主要治疗作用,盐酸小檗碱是二者的主要生物活性物质,因此研究中首先建立了盐酸小檗碱的HPLC分析方法,测定以浸泡时间、每次加水量、煎煮时间为考察因素时盐酸小檗碱的提取结果。研究结果表明,治糜组方中盐酸小檗碱最佳提取工艺为：黄连20 g、黄柏10 g、乳香15g、没药15 g,加水浸泡60 min,第1次煎煮15 min,第2次加水适量煎煮30 min,第3次加14倍水量煎煮2 h。治糜温敏凝胶是将治糜组方的水提液制成以泊罗沙姆407（P407）为凝胶基质的温度敏感凝胶。在研究中首先考察了壳聚糖溶液对治糜组方的絮凝澄清工艺,在获得稳定的治糜组方水提澄清液后,继续考察壳聚糖溶液、P407、聚乙二醇2000（PEG2000）和泊罗沙姆188（P188）对治糜温敏凝胶的胶凝温度和pH的影响。研究结果显示：壳聚糖絮凝治糜中药提取液工艺为：药液pH值为药物原液pH值（pH4.6）,絮凝温度：70℃,CTS溶液浓度：2%,CTS溶液体积：10.0-40.0 mL。壳聚糖溶液、PEG2000和P188对治糜温敏凝胶的特性有显著影响。治糜温敏凝胶胶凝温度随着2%壳聚糖溶液的用量、PEG2000质量分数和P188的质量分数的增加而升高,呈现正性相关；PEG2000和P188用量的增加不会显著改变同一质量分数的P407治糜温敏凝胶的pH值,壳聚糖用量的增加会改变P407治糜温敏凝胶的pH值。在进一步P188/P407治糜温敏凝胶胶凝性质和体外释放研究中发现,盐酸小檗碱在治糜温敏凝胶中的释放速率受凝胶的溶蚀速率影响,二者均遵循零级动力学方程,P407和P188的浓度是影响治糜温敏治糜温敏凝胶胶凝温度、凝胶黏度、溶蚀速率以及药物释放速率等性质的主要因素。治糜温敏凝胶理想的处方为治糜中药提取浓缩液50.0 mL,冰片0.08 g,2%壳聚糖溶液20.0 mL,P407 18.0g,P188 3.0 g,甘油10.0 mL,加蒸馏水至100 mL,其胶凝温度为24.0℃,体温下凝胶强度大,体外可持续释放药物在10.5 h左右。儿茶素和表儿茶素为儿茶中的主要有效成分,研究首先建立儿茶素和表儿茶素的HPLC分析方法,测定超声波提取法以提取溶剂中乙醇的浓度、料液比、提取温度和超声时间为考察因素时获得的儿茶提取液中有效成分。通过正交试验获得儿茶超声波法提取最佳提取工艺为：料液比为1：12,乙醇浓度为50%,超声时间为35 min,提取温度为60℃。儿茶凝胶是以卡波姆为凝胶基质的水凝胶。实验中对儿茶凝胶的外观、pH值、稳定性进行质量评价,对凝胶的体外释药性及大鼠抗炎药效进行研究。结果表明：卡波姆浓度的变化对儿荼素体外释放速率变化影响不大,儿茶凝胶处方确定为：卡波姆9400.5 g,甘油5.0 g,儿茶提取物40.0 ml,三乙醇胺0.5 mL,加水适量至50.0 g。按处方制备的儿茶凝胶细腻光洁、呈半透明状,体外释放药物快,作用时间长；对角叉菜胶所致的大鼠足趾肿胀具有明显的抑制作用,抗炎作用时间与凝胶剂量总的呈正性相关趋势。最后,本研究还就治糜温敏凝胶联合儿茶凝胶对实验性大鼠宫颈和阴道病理形态学影响作了进一步研究,结果发现治糜温敏凝胶、儿茶凝胶序贯联合应用,能有效治疗实验性宫颈糜烂大鼠。实验性宫颈糜烂大鼠,经过两制剂治疗后,阴道和子宫颈组织病变较模型对照组减轻,病变处组织已经开始修复,甚至接近正常。

论文目录

• 致谢
• 中文摘要
• Abstract
• 缩写语
• 目次
• 引言
• 1 治糜组方中盐酸小檗碱的提取工艺优选
• 1.1 仪器与试剂
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 盐酸小檗碱分析方法的建立
• 1.2.2 正交试验设计治糜组方中盐酸小檗碱的提取考察
• 1.3 结果
• 1.3.1 盐酸小檗碱HPLC色谱图
• 1.3.2 盐酸小檗碱标准曲线
• 1.3.3 精密度试验结果
• 1.3.4 加样回收率试验结果
• 1.3.5 正交试验设计治糜组方中盐酸小檗碱的提取考察结果
• 1.3.6 工艺验证结果
• 1.4 讨论
• 1.5 本章小节
• 2 治糜温敏凝胶的制备
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 治糜组方水提取液的制备
• 2.2.2 壳聚糖絮凝剂的制备
• 2.2.3 壳聚糖絮凝治糜组方水提液考察
• 2.2.4 ZTG的制备
• 2.2.5 ZTG胶凝温度的考察
• 2.2.6 ZTG PH值测定
• 2.2.7 ZTG的处方设计研究
• 2.2.8 ZTG中盐酸小檗碱的含量测定
• 2.2.9 ZTG体外释放介质选择研究
• 2.2.10 ZTG体外释放研究
• 2.2.11 ZTG的溶蚀行为考察
• 2.2.12 ZTG的流变学行为考察
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 壳聚糖絮凝治糜中药提取液考察结果
• 2.3.2 P407不同质量分数对ZTG胶凝温度和PH值的影响
• 2.3.3 2.0%壳聚糖溶液用量对ZTG PH值的影响
• 2.3.4 PEG2000对ZTG胶凝温度和PH值的影响
• 2.3.5 P188对ZTG胶凝温度和PH值的影响
• 2.3.6 ZTG中盐酸小檗碱含量测定
• 2.3.7 ZTG体外释放介质研究结果
• 2.3.8 ZTG的体外释放行为
• 2.3.9 ZTG体外溶蚀行为
• 2.3.10 ZTG的流变学性质
• 2.3.11 ZTG处方确定
• 2.4 本章小节
• 3 超声波法提取儿茶中总儿茶素工艺研究
• 3.1 仪器与试药
• 3.2 实验方法与结果
• 3.2.1 样品提取
• 3.2.2 正交试验设计
• 3.2.3 儿茶素和表儿茶素含量测定
• 3.2.4 样品中儿茶素和表儿茶素的含量测定
• 3.2.5 儿茶提取工艺验证试验
• 3.3 讨论
• 3.4 本章小节
• 4 儿茶凝胶的制备及抗炎药效学评价
• 4.1 仪器与试药
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 儿茶提取浓缩液的制备
• 4.2.2 乙酸乙酯萃取儿茶素和表儿茶素
• 4.2.3 儿茶凝胶的制备
• 4.2.4 儿茶凝胶中儿茶素和表儿茶素的含量测定
• 4.2.5 儿茶凝胶质量评价
• 4.2.6 儿茶凝胶的体外释放实验
• 4.2.7 儿茶凝胶对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀试验
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 乙酸乙酯萃取率考察结果
• 4.3.2 儿茶凝胶中卡波姆浓度的确定
• 4.3.3 儿茶凝胶剂的外观评价和PH值测定
• 4.3.4 稳定性实验结果
• 4.3.5 儿茶凝胶中儿茶素和表儿茶素的含量测定
• 4.3.6 儿茶凝胶的体外释放研究
• 4.3.7 儿茶凝胶对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀试验的影响
• 4.4 本章小节
• 5 治糜温敏凝胶联合儿茶凝胶对实验性大鼠宫颈和阴道病理形态学的影响
• 5.1 实验材料
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 实验性大鼠宫颈糜烂模型的建立
• 5.2.2 分组和给药
• 5.2.3 病理组织学检查
• 5.2.4 病理组织学评分标准
• 5.3 实验结果
• 5.3.1 各组对实验性宫颈糜烂大鼠阴道口外观影响
• 5.3.2 各组对实验性宫颈糜烂大鼠阴道宫颈外观影响
• 5.3.3 各组对实验性宫颈糜烂大鼠阴道宫颈组织病理形态学影响
• 5.4 讨论
• 5.5 本章小节
• 全文总结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 作者简历