肿瘤坏死因子-α可溶性受体对矽肺纤维化的干预研究

论文摘要

目的:本研究以大鼠矽肺动物模型为研究对象,通过测定矽肺相关生物活性介质并确定相关介质致纤维化的节点。初步探讨肿瘤坏死因子α（tumor necrosisαfactor,TNF-α）可溶性受体对二氧化硅（silicon dioxide,SiO2）粉尘致大鼠肺纤维化的防治作用以及相关细胞因子表达的影响。方法:根据随机化原则将大鼠分为3个实验组,即对照组（control group,CL）、染矽尘组（silica-instilled group,SA）、干扰组（intervention group,IN）,对照组、染矽尘组每组48只,干扰组10只。对照组大鼠气管内注入生理盐水,染矽尘组大鼠气管内注入矽尘混悬液1ml（50mg/ml）,干扰组大鼠气管内注入矽尘混悬液1ml（50mg/ml）后于1、5、8d给予500ug TNF-α可溶性受体皮下注射。气管暴露法建立大鼠矽肺模型,模型建立后,对照组、染矽尘组于1d、3d、7d、14d、21d、28d 6个时间点分别取8只大鼠将其处死。干扰组于7d、14d 2个时间点取5只大鼠处死。HE染色观察大鼠肺组织形态学的变化。血细胞计数仪测定支气管肺泡灌洗液细胞总数。天狼猩红染色法结合偏振光显微镜观察肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成。用Image-Pro Plus Version 4.5 for windows TM图象分析系统对图像进行分析。一氧化氮（nitrogen monoxidum,NO）测定采用南京建成生物工程研究所NO试剂盒。酶联免疫吸附法（ enzyme-labeledimmunosorbent assay,ELISA）检测对照组、染矽尘组和干扰组各时间点外周血核因子κB（nuclear factorκB,NF-κB）、转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）、白介素（interleukin-1,IL-1β）、TNF-α等4种生物活性介质表达水平。所有数值均用x±s表示,两组间采用t检验,不同组间的比较用单因素方差分析的LSD法,全部数据的统计学处理均采用SPSS15.0 for windows分析软件。结果: 1 HE染色法证实气管暴露注入SiO2粉尘悬液成功建立矽肺模型。2 TNF-α可溶性受体对染矽尘大鼠肺脏器系数的影响。与对照组比较,染矽尘组大鼠7d以后各时间点肺脏器系数高于对照组（P<0.05）;与染矽尘组比较,干扰组大鼠各时间点肺脏器系数低于染矽尘组,但高于对照组,差异有显著性（P<0.05）。3 TNF-α可溶性受体对染矽尘大鼠肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid,BALF）白细胞总数的影响。与对照组比较,染矽尘组相应时间点BALF白细胞总数均不同程度增高,在14d、21d、28d具有显著性差异（P<0.01）;与染矽尘组比较,干扰组各相应时间点BALF白细胞总数均小于染矽尘组,在14d差异有显著性（P<0.05）。4 TNF-α可溶性受体对染矽尘大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。与对照组比较,染矽尘组7d、14d、21d、28dⅠ型胶原均高于对照组,差异有显著性（P<0.01）;与染矽尘组比较,干扰组各时间点Ⅰ胶原低于染矽尘组组,在14d差异有显著性（P<0.05）。与对照组比较,染矽尘组各时间点Ⅲ胶原在21d时上升陡然趋缓,仅在7d、14d、21d时有显著性差异（P<0.01）;与染矽尘组比较,干扰组各时间点Ⅲ胶原均低于染矽尘组,但仅在14d差异有显著性（P<0.05）。5 TNF-α可溶性受体对染矽尘大鼠外周血清NO表达的影响。与对照组比较,染矽尘组各时间点外周血清NO的浓度均高于对照组（P<0.01）,在7d、14d、21d、28d具有显著性差异（P<0.05）;与染矽尘组比较,干扰组各时间点外周血清NO浓度低于染矽尘组,在14d时差异有显著性（P<0.05）。6 TNF-α可溶性受体对染矽尘大鼠外周血清IL-1β表达的影响。与对照组比较,染矽尘组各时间点外周血清IL-1β的浓度均高于对照组（P<0.01）,但仅在3d、7d时有显著性差异（P<0.05）。与染矽尘组比较,干扰组各时间点外周血清IL-1β浓度低于染矽尘组,在7d时差异有显著性（P<0.01）。7 TNF-α可溶性受体对染矽尘大鼠外周血清TGF-β表达的影响。与对照组比较,染矽尘组在14d、21d、28d时外周血清TGF-β的浓度高于对照组（P<0.01,P<0.05）,其表达高峰在染矽尘后的第21d;与染矽尘组比较,干扰组各时间点外周血清TGF-β浓度低于染矽尘组,在14d时差异有显著性（P<0.05）。8 TNF-α可溶性受体对染矽尘大鼠外周血清NF-κB表达的影响。与对照组比较,染矽尘组各时间点外周血清NF-κB的浓度均高于对照组（P<0.01,P<0.05）,其表达高峰在染矽尘后的第21d;与染矽尘组比较,干扰组各时间点外周血清NF-κB浓度低于染矽尘组,差异有显著性（P<0.05）。9 TNF-α可溶性受体对染矽尘大鼠外周血清TNF-α表达的影响。染矽尘组与干扰组各时间点外周血清TNF-α的浓度比较无统计学意义;与染矽尘组比较,干扰组各时间点外周血清TNF-α浓度低于染矽尘组,但差异无显著性。结论:本研究认为:1大鼠支气管内滴入矽尘可引起大鼠肺组织炎性和纤维化性病理变化,并有矽结节形成。2 TNF-α可溶性受体可以缓解矽尘诱导的大鼠肺脏器系数的增加。3 TNF-α可溶性受体对矽尘诱导的大鼠BALF中细胞总数的显著增加有抑制作用。4 TNF-α可溶性受体能够抑制矽尘诱导的大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的增加。5 TNF-α可溶性受体能够抑制矽尘诱导的大鼠肺外周血清中NO、IL-1β、TGF-β1、NF-κB、TNF-α的表达水平。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 肿瘤坏死因子-α可溶性受体对矽肺纤维化的干预研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 个人简历