p55、paxillin、vinculin在早期胰腺中的表达模式分析

论文摘要

p55基因编码一个从线虫到人类非常保守的蛋白,它与人类HSPC117高度同源。HSPC117是一细胞黏附相关蛋白,可以结合纽蛋白（vinculin）,vinculin能够与桩蛋白（paxillin）结合,以减少paxillin-FAK的相互作用,从而调控细胞存活和运动。但p55、vinculin和paxillin在胰腺发育中的作用还不清楚。为了探索p55、vinculin和paxillin在小鼠胰腺发育中的时空表达模式,了解p55、vinculin和paxillin在胰腺发育中的功能,本研究从小鼠胰腺中克隆了vinculin和paxillin基因片段;通过半定量RT-PCR方法检测了p55在小鼠胚胎发育E12.5、E13.5、E15.5、E17.5和出生后及成体的表达变化;通过原位杂交、免疫组化研究了p55、vinculin和paxillin在胚胎期E10.5、E12.5、E13.5、E15.5、E17.5胰腺的时空表达谱。半定量RT-PCR结果表明,P55 mRNA在E12.5、E13.5、E15.5、E17.5、出生到成体胰腺中均有表达,但整体表达水平变化不大。通过整体原位杂交方法没有检测到E10.5胰芽中p55 mRNA的表达。通过原位杂交和免疫组化联合染色发现,p55在E12.5和E13.5天胰腺的上皮分支末端细胞中有较强表达;在E15.5的全部胰腺上皮中均有表达,但单个细胞中的p55表达强度下降;E17.5天胰腺没有检测到p55的表达;paxillin在胰腺上皮中的表达模式与p55相似,但paxillin在胰腺间质中也维持低水平的表达。vinculin仅在胰腺上皮中表达,从E12.5到E15.5天的变化幅度不大,到E17.5天表达下降。因而,p55在胰腺发育的第二次转换前后高表达于胰腺上皮外周分支生长的末端,paxillin和vinculin在此区域同样也有较高水平的表达,暗示它们可能与胰腺发育过程中上皮分支生长时细胞的迁移和黏附有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 胰腺
• 1.1.1 胰腺的构成
• 1.1.2 胚胎胰腺发育调控机制研究进展
• 1.2 p55基因简介
• 1.3 Paxillin和vinculin与p55的相关性研究
• 1.3.1 Paxillin基因生物学特性
• 1.3.2 Vinculin基因生物学特性
• 1.3.3 FAAP蛋白与paxillin、vinculin的生物学关系
• 1.4 本研究目的及意义
• 2 p55在胰腺早期发育中表达的初步检测
• 2.1 试验动物与取材
• 2.1.1 试验动物
• 2.1.2 取材
• 2.2 主要仪器与药品
• 2.2.1 仪器设备
• 2.2.2 PCR引物设计
• 2.2.3 试剂药品
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 胰腺总RNA提取
• 2.3.2 半定量RT-PCR
• 2.3.3 基因克隆
• 2.4 实验结果
• 2.4.1 半定量RT-PCR检测p55在早期胰腺发育中的表达
• 2.4.2 基因克隆分析
• 2.5 讨论
• 2.6 本章小结
• 3 p55、paxillin、vinculin在小鼠早期胰腺中的表达
• 3.1 实验动物与取材
• 3.1.1 实验动物
• 3.1.2 取材
• 3.2 实验仪器与药品
• 3.2.1 主要实验仪器
• 3.2.2 药品与溶液
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 原位杂交
• 3.3.2 原位杂交与免疫组化联合法
• 3.3.3 胚胎整体原位杂交
• 3.4 实验结果
• 3.4.1 p55 mRNA在小鼠胰腺中的表达
• 3.4.2 paxillin和vinculin mRNA在小鼠早期胰腺中的表达
• 3.5 讨论
• 3.6 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢