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应用组织工程材料栓塞动脉瘤的实验研究

2020-12-07阅读(926)

应用组织工程材料栓塞动脉瘤的实验研究

论文摘要

目的:探讨壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶作为颅内动脉瘤栓塞材料的可行性。为组织工程方法治疗动脉瘤提供实验依据。方法:利用介入法结合弹力蛋白酶诱导兔颈总动脉,建立兔动脉瘤模型;用酶消化法从兔颈部皮肤中原代分离培养成纤维细胞,确定Brdu标记方法;配制2%（w/v）壳聚糖与56%（w/v）甘油磷酸钠溶液,不同比例混合,测定混合液pH、37℃成胶时间及力学强度,体外观察兔皮肤成纤维细胞在不同配比壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶中生长状态,选择既适合导管内操作又适合成纤维细胞生长的最佳比例;将Brdu标记的成纤维细胞与壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶混合栓塞兔颈动脉,评价组织相容性。最终栓塞兔动脉瘤模型。结果:（1）利用介入法结合弹力蛋白酶诱导兔颈总动脉,建立兔动脉瘤模型,4周时造影,观察动脉瘤宽径平均4.6±0.64mm;动脉瘤长径平均7.2±1.2mm;载瘤动脉即右侧头臂干直径平均4.0±0.72mm。（2）胶原酶消化法及皮片接种法均可获得原代成纤维细胞,其中胶原酶消化法获得种子细胞效率高,更适合组织工程快速大量获得种子细胞的要求。胶原酶消化法在4小时时获得的有活性细胞量最多。Brdu可用于兔成纤维细胞标记,最佳标记方法为5ug/ml标记24小时。（3）当壳聚糖/甘油磷酸钠在7:1时,pH值为7.28,成胶时间为260±18s,力学强度可达14KPa,细胞生存率最高,达（89±2.74）%。体外栓塞玻璃管动脉瘤模型见壳聚糖-甘油磷酸钠经过微导管原位成胶。（4）动物体内实验:颈动脉栓塞,透视下可见混合物显影良好,局部组织切片显示（HE染色）:1周时凝胶中散在较多细胞及钽粉,凝胶与血管壁边界较清,内皮细胞完整。4周时凝胶与血管壁边界不清,可见周边凝胶被细胞成分包绕降解。免疫荧光显示:4周标本中可见较多标记的成纤维细胞。兔动脉瘤栓塞术中见动脉瘤不显影,术后3d病理见动脉瘤被凝胶栓塞,内膜细胞形态正常,动脉壁内未见明显炎性细胞侵润。结论:本研究通过优化壳聚糖-甘油磷酸钠配比,构建壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶材料,利用这种材料进行兔颈动脉及动脉瘤模型栓塞。短期观察,证实壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶可用于动脉瘤栓塞。为组织工程方法治疗动脉瘤提供实验依据。

论文目录

  • 提要
  • 英文缩写词表
  • 第一篇 前言
  • 第二篇 文献综述
  • 综述一 动脉瘤动物模型建立
  • 1 动物的选择
  • 2 构建方法及评价
  • 3 现状和展望
  • 综述二 颅内动脉瘤血管内栓塞材料进展
  • 1 微弹簧圈
  • 2 表面修饰微弹簧圈
  • 3 液体栓塞剂ONYX
  • 4 栓塞宽颈动脉瘤的辅助器材
  • 5 展望
  • 综述三 医用水凝胶综述
  • 1 水凝胶的概述
  • 2 水凝胶成胶机理
  • 3 可注射原位成型水凝胶来源
  • 4 水凝胶在组织工程方面的应用
  • 第三篇 实验研究
  • 第一章 兔动脉瘤模型的建立
  • 第一节 实验材料
  • 1 实验动物
  • 2 主要试剂
  • 3 仪器与设备
  • 4 常用溶液配制
  • 第二节 实验方法
  • 1 试验性兔耳缘静脉造影及股动脉造影
  • 2 动脉瘤模型的建立
  • 3 病理标本的制作及检查
  • 4 数据处理
  • 第三节 结果
  • 1 动、静脉造影对比结果
  • 2 实验组术后1 周，2 周，4 周耳缘静脉造影结果
  • 3 对照组术后1 周，2 周，4 周耳缘静脉造影结果
  • 4 病理学检查
  • 第四节 讨论
  • 1 动脉瘤形成机制的认识
  • 2 耳缘静脉造影复查的优越性
  • 3 该方法制作动脉瘤的优越性
  • 4 该动脉瘤模型存在的不足
  • 第五节 结论
  • 第二章 兔皮肤成纤维细胞原代培养及标记
  • 第一节 实验材料
  • 1 实验动物
  • 2 主要试剂
  • 3 仪器与设备
  • 4 常用溶液配制
  • 第二节 实验方法
  • 1 兔皮肤成纤维细胞的分离与培养
  • 2 兔成纤维细胞的Brdu标记
  • 3 数据处理
  • 第三节 结果
  • 1 兔皮肤成纤维细胞分离、培养、纯化、及鉴定的观察
  • 2 Brdu标记兔成纤维细胞的观察
  • 第四节 讨论
  • 第五节 结论
  • 第三章 壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶优化
  • 第一节 实验材料
  • 1 实验动物
  • 2 原材料、主要试剂
  • 3 主要仪器
  • 4 常用溶液配制
  • 第二节 实验方法
  • 1 可注射性C-GP混合溶液的制备
  • 2 不同容积比的C-GP混合溶液pH值、凝固时间及力学强度的测定
  • 3 体外动脉瘤模型栓塞
  • 4 细胞二维、三维生长
  • 5 C-GP水凝胶组织相容性试验
  • 6 数据处理
  • 第三节 结果
  • 1 C-GP物理性状
  • 2 C-GP体外栓塞玻璃管动脉瘤模型
  • 3 成纤维细胞与C-GP凝胶二维、三维培养观察
  • 4 组织相容性实验观察
  • 第四节 讨论
  • 1 壳聚糖成胶机制
  • 2 C-GP制备及影响因素
  • 3 C-GP的细胞相容性
  • 4 C-GP的组织相容性
  • 第五节 结论
  • 第四章 壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶动物体内实验观察
  • 第一节 实验材料
  • 1 实验动物
  • 2 原材料、主要试剂
  • 3 主要仪器
  • 第二节 实验方法
  • 1 C-GP-FB水凝胶栓塞兔颈总动脉观察
  • 2 兔动脉瘤模型栓塞实验
  • 第三节 结果
  • 1 颈动脉栓塞观察
  • 2 动脉瘤栓塞观察
  • 第四节 讨论
  • 第五节 结论
  • 第四篇 结论
  • 1 兔动脉瘤模型的建立
  • 2 兔皮肤成纤维细胞原代培养及标记
  • 3 壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶优化
  • 4 壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶动物体内实验
  • 5 需要进一步探讨问题
  • 6 本研究创新点
  • 参考文献
  • 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果
  • 致谢
  • 中文摘要
  • Abstract

    • 相关论文文献

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