宫颈病变中FHIT基因微卫星不稳定性与错配修复基因表达的相关性研究

论文摘要

目的:在全世界范围内,宫颈癌是女性癌症中最常见的死亡原因之一。高危型人乳头状瘤病毒（human papillomo- viruses, HPV）感染是其发生的主要因素之一,但HPV感染并不能单独导致宫颈癌,遗传学改变在宫颈癌的发生、发展方面也起了非常重要的作用。宫颈癌的发生是一个多因素、多步骤综合作用的结果,其发生、发展与多个基因的激活或失活有关。近年来研究发现DNA修复基因突变引起DNA错配修复系统的功能降低或丧失,从而引起遗传物质不稳定,主要表现为微卫星不稳定性（microsatellite instability, MSI）,进而导致肿瘤的发生。目前国内外同时对MSI和错配修复基因hMLH1、hMSH2与宫颈癌发生关系的研究很少,因此本研究通过对宫颈癌及癌前病变中脆性组氨酸三联体（fragile histidine traid, FHIT）基因中两个微卫星位点的MSI分析以及对错配修复基因hMLH1、hMSH2蛋白缺失表达的检测,并分析两者之间的相关性,探讨其在宫颈癌发生、发展中的重要作用,为阻断宫颈上皮内瘤样病变（cervical intraepithelial neoplasia , CIN）向宫颈癌的恶性转化提供新的思路,为探询宫颈癌的发生、发展机制提供一定理论依据,同时也为宫颈癌临床诊断和合理治疗奠定理论基础。方法:1标本收集:收集2006年6月2007年6月在河北医科大学附属第二医院宫颈病变门诊活检或病房手术的CINⅠ组织42例、CINⅡCINⅢ组织24例、宫颈癌组织56例（均为宫颈鳞癌）。每例患者手术或活检时留取小部分病变宫颈组织,同时取病变周围的正常宫颈组织作自身对照,如无条件获取正常组织,则抽取患者静脉血3ml,作自身对照。将病变组织一分为二,一部分同其正常组织配对放入冻存管中,速冻于液氮中,然后贮存于-80℃冰箱备用,另一部分病变组织投入4%多聚甲醛固定。所有患者术前均未接受过放疗和化疗,术后经病理证实。2 MSI的检测:采用聚合酶链反应-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-溴化乙锭染色技术检测FHIT基因中2个微卫星位点D3S1300和D3S1234的MSI。按照DNA提取试剂盒说明提取组织DNA,应用相应引物进行PCR扩增,扩增产物通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和溴化乙锭染色进行分析。检测结果判定:与正常组织相比,若病变组织出现DNA等位条带的增多、减少或移位,即判断为MSI阳性。3错配修复基因hMLH1、hMSH2在不同宫颈病变组织中缺失表达的检测:采用免疫组织化学方法进行检测。4统计方法:应用SPSS13.0统计软件对结果进行统计处理。MSI状态在不同宫颈病变组织、不同位点、宫颈癌临床分期、病理分级中的差异,hMLH1、hMSH2蛋白缺失表达水平在CINⅠ组、CINⅡCINⅢ组和宫颈癌组的差异,采用chi-squareχ2或Fisher’s确切概率法检验。宫颈癌MSI与hMLH1、hMSH2缺失表达的相关性采用spearman相关性检验,检验水准为0.05,P<0.05有统计学意义。结果:1 MSI的检测情况1.1 MSI在不同宫颈病变组织中的情况在122例病变的宫颈组织中,MSI总的检出率为9.02% （11/122）,其中42CINⅠ组织中MSI总检出率为0%（0/42）,24例CINⅡⅢ组织中MSI总检出率为4.17% （1/24）,56例宫颈癌组织中MSI总检出率为17.86%（10/56）。三组之间MSI的检出率差异有统计学意义（P<0.05）,CINⅠ组与CINⅡⅢ组的MSI检出率差异无统计学意义（P>0.05）,两组与宫颈癌组差异有统计学意义（P<0.05）。1.2不同微卫星位点的MSI情况在122例宫颈病变标本中,位点D3S1300和D3S1234上出现MSI的阳性率分别4.00% （5/122）、4.76%（6/122）,其中CINⅡⅢ组中的1例MSI出现在D3S1300位点上,宫颈癌组中出现10例MSI,其中4例出现在D3S1300位点上,6例出现在D3S1234位点上。两个微卫星位点之间差异无统计学意义（P>0.05）。在宫颈癌中,D3S1300和D3S1234上出现MSI的阳性率分别为7.14%（4/56）、10.71% （6/56）,差异无统计学意义（P>0.05）。1.3 MSI与宫颈癌临床分期的关系MSI出现在宫颈癌组织Ⅰ期2例（2/22,9.09%）,Ⅱ期4例（4/28,14.28%）,ⅢⅣ期4例（4/6,66.67%）,差异有统计学意义（P<0.05）。Ⅰ期与Ⅱ期之间差异无统计学意义（P>0.05）。Ⅰ期、Ⅱ期与ⅢⅣ期差异有统计学意义（P<0.05）。1.4 MSI与临床病理分级的关系MSI出现在宫颈癌组织高分化鳞癌4例（4/22,18.18%）,中分化鳞癌2例（2/16,12.50%）,低分化鳞癌4例（4/18,22.22%）,差异无统计学意义（P>0.05）。2错配修复基因hMLH1、hMSH2在不同宫颈病变组织中的缺失表达2.1错配修复基因hMLH1在宫颈病变组织中的缺失表达免疫组化的结果表明,hMLH1蛋白缺失表达从CINⅠ到浸润性宫颈癌呈渐进性升高,CINⅠ组、CINⅡⅢ组、宫颈癌组hMLH1蛋白缺失表达率分别为14.3%（6/42）、25% （6/24）、42.9%（24/56）。卡方检验表明,三组差异有统计学意义（P<0.05）;CINⅠ组与CINⅡⅢ组相比,差异无统计学意义（P>0.05）,两者与宫颈癌组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。2.2错配修复基因hMSH2在宫颈病变组织中的缺失表达免疫组化的结果表明,hMSH2蛋白缺失表达从CINⅠ到浸润性宫颈癌呈渐进性升高,CINⅠ组、CINⅡⅢ组、宫颈癌组hMSH2蛋白缺失表达率分别为11.9%（5/42）、16.7% （4/24）、28.6%（16/56）。卡方检验表明,三组差异无统计学意义（P>0.05）。3宫颈癌中MSI与错配修复基因hMLH1、hMSH2蛋白缺失表达的相关性3.1宫颈癌中MSI与hMLH1缺失表达的相关性宫颈癌中表现为MSI阳性的10例中9例为hMLH1缺失表达,应用spearman秩相关检验表明,rs=0.444,P<0.05,MSI与hMLH1缺失表达存在正相关。3.2宫颈癌中MSI与hMSH2蛋白缺失表达的相关性宫颈癌中表现为MSI阳性的10例中有4例为hMSH2蛋白缺失表达,spearman秩相关检验表明,rs=0.142,P>0.05,MSI与hMLH1缺失表达无相关性。结论:1 MSI的检出率随着宫颈病变程度的升高而升高,且在宫颈癌中的检出率远远高于CIN,表明FHIT基因的MSI在CIN中是个晚期事件;检测FHIT基因的MSI可作为病程进展及预后的重要参考指标,对于宫颈癌的早期诊断和筛查是有帮助的,对于宫颈癌的预后是有意义的。2宫颈癌中MSI随着临床分期的升高而升高,表明MSI在宫颈癌的发展过程中起重要作用,是宫颈癌恶性进展中的早期事件。3宫颈癌中MSI与病理分级无关,表明MSI是宫颈鳞状上皮细胞癌发生的早期事件。4 hMLH1蛋白缺失表达从CINⅠ到浸润性宫颈癌呈渐进性升高,宫颈癌的缺失表达显著高于CIN,且与MSI具有正相关性,认为该基因的缺失可能是产生MSI的根本原因。5 hMSH2蛋白缺失表达从CINⅠ到浸润性宫颈癌呈渐进性升高,三组之间无显著性差异,hMSH2蛋白缺失表达与MSI无性关性,认为hMSH2表达缺失虽然与MSI的关系不大,但仍有可能是早期宫颈癌的危险因素。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 宫颈病变中FHIT 基因微卫星不稳定性与错配修复基因表达的相关性研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 宫颈病变中FHIT 基因遗传不稳定性与错配修复基因
• 致谢
• 个人简历