海洋来源产酶微生物的筛选、鉴定及其外泌产物的生物学作用探索

论文摘要

目的筛选海洋来源高产酶的细菌、放线菌,对其进行形态学、生理生化性质、分子生物学鉴定初步确定种属,并研究其生长特性及外泌产物的生物学作用。方法对从青岛黄海海域的鱼类、贝类、海水、海泥等样品中分离的产酶细菌、放线菌,分别用蛋白酶、淀粉酶、胶原酶酶活力测定方法进行高产株的筛选；常规微生物学方法鉴定其形态及生理生化特性,分子生物学鉴定方法初步确定种属；检测高产株的最适生长温度、pH值、NaCl浓度以及在不同温度、生长时间、pH值条件下的产酶能力,优化产酶条件；以发酵液上清为样品,经SDS-PAGE初步确定分泌物的分子量,研究其酶的最适作用温度、最适作用pH值等；从酶活性、抗肿瘤活性、免疫活性等方面初步探索代谢物的生物学作用。结果从鲳鱼消化道中筛选出高产蛋白酶菌株XF-1,16S rRNA基因测序和系统发育树分析证实该菌为Aranicola pro teolyticus;该菌为革兰染色阴性杆菌,好氧,无芽孢,无荚膜,有鞭毛。在奶粉平板上的菌落：直径1-2 mm,圆形乳白色、光滑、边缘整齐、半透明。其生长温度范围为15-37℃,最适生长温度为25℃。生长pH范围：5.5-9.0,最适生长pH为7.5。生长NaCl浓度为0-6%,最适浓度为1%；所产蛋白酶活力约145 U/mL,最佳产酶条件为pH7.5、25℃振荡培养28h；经SDS-PAGE初步确定蛋白酶的分子量约为43-55KD,最适酶活温度为40℃,最适pH为7.5；XF-1可以分泌多种物质,对酪蛋白具有分解作用,对奶粉具有凝集作用,具有一定的抗肿瘤和免疫增强的生物学作用。结论成功筛选出蛋白酶高产菌株XF-1,其产生的代谢物具有较好的生物学作用,有望成为一种新型的海洋微生物蛋白酶资源。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 海洋来源产酶微生物的筛选及其酶活力测定
• 引言
• 摘要
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二章 高产蛋白酶菌株XF-1的鉴定及其产酶条件的优化
• 引言
• 摘要
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三章 海洋微生物XF-1外泌产物生物学作用的初步研究
• 引言
• 摘要
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论和展望
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢