论文摘要
奶牛乳房炎是由多种原因引起的奶牛乳腺炎症，使奶牛生产性能下降，严重危害我国奶牛业的发展。导致奶牛乳房炎的病原种类众多，给该病的预防和治疗带来困难。随着分子生物学技术的迅速发展，分子抗病育种成为防治奶牛乳房炎的一条新途径。奶牛MHC基因即BoLA（Bovine Lymphocyte Antigen）基因，以其丰富的多态性和高度连锁不平衡等特点，受到遗传育种学家的高度重视。很多国内外学者从MHC基因与体细胞数相关性、与单一病原体易感程度的相关性，与乳房炎易感性和抗性等几个方面进行了研究。本试验对224头泌乳期中国荷斯坦奶牛进行了乳房炎检测，并对主要病原菌进行了分离鉴定，检测了BoLA-DRB3第二外显子的基因多态性，并分析了各基因型与3种主要病原菌引起乳房炎的相关性。本试验为开展分子抗病育种进行初步尝试。1奶牛乳房炎的检测与主要病原的分离鉴定使用兰州畜牧兽医研究所研制的乳房炎诊断试剂，对山东省济南、东营两地及其周边地区大型奶牛场的224头泌乳期的中国荷斯坦奶牛进行乳房炎检测，检出患病奶牛占所检牛群的72.32％。对乳房炎阳性乳样进行细菌分离，纯培养和生化鉴定，结果共分离到11种病原菌，其中金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌为主要致病菌，由这3种病原菌引起的乳房炎占总患病牛只的86.21％。根据细菌的16sRNA等特异性保守基因序列设计引物，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌进行了PCR鉴定，与生化鉴定结果一致。2奶牛BoLA-DRB3.2基因PCR-RFLP分析采用PCR-RFLP技术分析了224头中国荷斯坦牛BoLA-DRB3.2基因的多态性。结果表明，所检测牛群中BoLA-DRB3.2基因在HaeⅢ和RsaⅠ两个酶切位点，存在丰富的多态性。HaeⅢ酶切位点存在4种等位基因，有4种基因型；RsaⅠ酶切位点存在3种等位基因，有4种基因型。经x2适合性检验，所检测牛群中BoLA-DRB3.2基因在HaeⅢ和RsaⅠ这两个酶切位点上均未达到Hardy-weinberg平衡状态。3相关性分析将分离鉴定乳房炎致病菌的种类和数量数据与基因型数据整合，通过SAS数据分析软件，分析BoLA-DRB3.2基因各基因型与奶牛对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌性乳房炎的易感程度的相关性。结果表明：HaeⅢBC基因型与金黄色葡萄球菌感染引起的奶牛乳房炎显著相关，RsaⅠEE，RsaⅠEF基因型与大肠杆菌感染引起的奶牛乳房炎显著相关。本试验为奶牛乳房炎抗病基因的筛选提供了有价值的参考数据。