论文摘要
为了阐明内分泌干扰物双酚A（BPA）对水生动物的毒理作用机制、内分泌干扰作用及其机制。研究了BPA对斑马鱼急性毒性作用,BPA对斑马鱼的肝脏损伤以及氧化胁迫作用,BPA对斑马鱼的性腺组织损伤以及生殖作用的影响,BPA对斑马鱼的肝脏Esr1（ERα）、AhR2以及VTG mRNA表达的影响。结果表明:BPA对斑马鱼具有急性毒性作用,BPA暴露会对斑马鱼的肝脏、性腺产生组织损伤作用,BPA影响斑马鱼的生殖作用;BPA对斑马鱼具有内分泌干扰作用。1.斑马鱼的BPA急性毒性实验BPA曝毒6 h,高浓度组斑马鱼出现游动缓慢,身体逐渐失去平衡,侧游,仰游,沉底,呼吸微弱等现象。曝毒12 h,高浓度组斑马鱼出现死亡现象,死亡个体胸鳍,腹部出现暗红色异常。BPA对斑马鱼的96h半致死浓度为6.3 mg L-1,斑马鱼对BPA较为敏感,安全浓度为0.63 mg L-1。2.BPA对斑马鱼的肝脏损伤和氧化胁迫作用为了进一步了解BPA对斑马鱼的毒性以及致毒机理,对斑马鱼进行BPA暴露,定时取斑马鱼肝脏用于检测BPA对斑马鱼的肝脏损伤和氧化胁迫作用。96 h暴露对斑马鱼的肝脏产生了浓度依赖性损伤。在0.2 mg L-1亚致死浓度BPA组中,暴露96 h后,斑马鱼肝脏受到轻微损伤;在2 mg L-1亚致死浓度BPA组中,暴露96 h,斑马鱼的肝脏组织受到了一定损伤,细胞核萎缩变形,细胞肿胀,核固缩;在6.1 mg L-1BPA组中暴露96 h,斑马鱼肝脏产生了极大的损伤,细胞空泡化,大面积的组织坏死,空洞产生。暴露6h各个浓度组SOD活力均表现为激活,活力水平高于对照组,其中0.2和2 mg L-1浓度组激活效应不明显（P>0.05）,6.1 mg L-1浓度组SOD活力显著增强（P<0.05）。暴露12h后,处理组SOD活力与对照组相比没有显著变化。暴露24小时,处理组SOD活力均低于对照组。以上结果表明,96h亚致死浓度情况下,SOD活力与对照组相差不大（P>0.05）;高浓度组(6 mg L-1BPA)处理后,SOD活力水平在6h显著升高,随着暴露时间的延长逐渐恢复至正常水平。亚致死浓度组(0.1,0.6 mg L-1)BPA处理后,48h检测结果显示GPX活力被诱导（P<0.05）;高浓度组(6 mg L-1BPA)处理后,斑马鱼肝脏GPX活力被诱导。BPA对斑马鱼肝脏具有靶器官毒性。3.BPA对斑马鱼的性腺损伤为了了解BPA对斑马鱼的性腺损伤和损伤机制,对斑马鱼进行了不同浓度BPA暴露96h。在高浓度组(6.3 mg L-1),斑马鱼精巢结构损伤,卵泡萎缩严重（闭锁率35%）;在0.2 mg L-1亚致死浓度BPA组中,性腺组织结构没有明显损伤,卵巢中处于第Ⅲ时相晚期和第Ⅳ时相配子数比率增加,单个卵母细胞直径增加（P<0.05）;在2 mg L-1亚致死浓度BPA组中,暴露96 h,斑马鱼性腺组织受损不明显,卵巢中第Ⅲ时相晚期第Ⅳ时相配子数比率有所增加;在6.1 mg L-1BPA组中,暴露96 h,斑马鱼精巢组织结构受到一定损伤,卵巢中发现大量细胞萎缩现象;BPA对性腺作用值得进一步研究。精巢精子头计数结果显示,低浓度(2 mg L-1)和中浓度(6 mg L-1)的BPA暴露后,斑马鱼每克精巢精子头数目先增加后减少,而高浓度(8 mg L-1)组表现为显著抑制作用,每克精巢精子头数目减少。精子头计数结果与精巢组织切片观察结果一致。4.BPA在斑马鱼中的内分泌干扰作用为了探讨双酚A对斑马鱼肝脏Esr1、AhR2以及VTG1 mRNA表达的影响,从而探明BPA对斑马鱼产生内分泌干扰作用可能的作用机制,在96h亚致死浓度范围内设置一个浓度组(2 mg L-1)对雄性斑马鱼进行曝毒实验。结果表明:雄性斑马鱼BPA暴露12h,Esr1和VTG1被显著诱导,与曝毒0h相比差异显著（P<0.05）。雄性斑马鱼BPA暴露24小时,Esr1和VTG1mRNA相对表达量依旧保持相当高的水平,与曝毒0h相比差异显著（P<0.05）。暴露48h,Esr1的相对表达量继续升高。暴露72h,Esr1和VTG1mRNA相对表达量低于暴露12,24和48h,与0h相比没有显著差异（P>0.05）。BPA暴露96小时中,AhR2在48h被诱导,mRNA相对表达量为0h的3.22倍。暴露过程中,Esr1和VTG1mRNA相对表达量变化一致。本实验选用的BPA染毒浓度为亚致死浓度2 mg L-1,证明BPA对雄性斑马鱼的Esr1和VTG1mRNA诱导能力较强。对AhR2具有一定的诱导作用,但是诱导能力较弱。结果表明BPA对斑马鱼的内分泌干扰作用存在多途径过程。