植物内生菌绿色木霉（Trichoderma viride）对油菜菌核病的生物防治

论文摘要

油菜菌核病是一种世界性病害,在五大洲的100多个国家皆有发生,其地理分布极为广泛。它是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的一种真菌病害。在中国,油菜菌核病居油菜三大病害之首,一般发病率为10%～30%,严重时可以达到80%以上。在长江中、下游及东南沿海一些主要的油菜产区,包括江苏、安徽、上海、湖南、浙江、江西、湖北等地病害的发生尤为突出,严重影响了我国的油菜生产。本实验从千年古银杏树、茶树以及红豆树的根、茎、叶内分离内生真菌和根际土壤中分离真菌,筛选出对油菜菌核病有拮抗作用的生防真菌；通过室内拮抗、孢子萌发等试验及定殖、缽栽、田间防病实验,探明拮抗真菌对油菜菌核病的生防潜能,取得以下研究结果。1、生防真菌的分离、筛选和鉴定对从四川省雅安市采集的银杏树、茶树以及红豆树等3种植物的根、茎、叶内生真菌和根际土壤种分离真菌,共分离得到内生真菌73株、根际土壤真菌29株；通过对油菜菌核病菌的拮抗试验,筛选出有较强拮抗作用的红豆树内生真菌1株。通过形态鉴定,将该内生真菌鉴定为绿色木霉(Trichoderma viride)。2、绿色木霉(T. viride)对油菜菌核病菌的拮抗作用和对子囊孢子萌发的影响利用绿色木霉(T. viride, HJZ3)菌株的发酵液抑制油菜菌核病菌菌丝生长的实验,测定抑制率达到90%以上；采用发酵液浸泡菌核和发酵液加入PDA平板两种试验方法,测定HJZ3对油菜菌核萌发的抑制率,发酵液稀释2倍时,对油菜菌核病菌菌核萌的抑制率分别为66%,60%；在稀释5倍时,对菌核萌发的抑制作用相比较稀释2倍时有所下降,抑菌率分别降低为30%,34%。HJZ3发酵液在稀释2倍,5倍,10倍时,菌核病菌子囊孢子的萌发率分别为58.3%,85.8%,90.4%,HJZ3菌株在稀释2倍,5倍,10倍时孢子的萌发率分别为6.9%,23.1%,53.6%。3、绿色木霉(T. viride)在油菜体内的定殖通过药物链霉素标记绿色木霉(T.viride),在油菜植株根际土壤及油菜植株体内的定殖能力进行测定。试验结果证明：HJZ3能够较好的在油菜植株根际及体内定殖,菌株直接灌根处理接种后的第3d,在苗根部分离到的菌量达204cfu/mg,显著高于茎和叶,说明菌株易进入油菜苗体内。并且于接菌后3、5、8、11、15d随机取5株油菜苗进行标记菌的分离,试验证明,标记的HJZ3菌株可在油菜根际土中及其定殖。4、绿色木霉(T. viride)对油菜的生长的影响拮抗菌液浸种对油菜种子的出苗率、植株生长有显著的促进作用。其中,接种的种子出苗率较未接种的对照提高了2.29(P<0.05),并且出苗整齐、迅速；植株株高、干物质重量均明显高于清水对照,差异达到了显著水平(P<0.05)或极显著水平(P<0.01)。5、绿色木霉(T. viride)对油菜菌核病的室内及田间控病效果进行室内盆栽试验,对照病斑大小为23.4mm,供试的两种化学药剂及生防菌液的处理病斑大小均在5～10mm之间,对比试验结果,筛选出的拮抗真菌对油菜菌核病确实有明显的抑制作用；在田间试验中,统计油菜菌核病的田间病株率,对照高达94.2%,两种化学药剂及生防菌液的处理均在50%～60%之间,对照的病情指数为71.7%,生防菌液为17.5%,两种化学药剂和生防菌液的田间防效均在65%～70%,但是生防菌液处理与之前室内盆栽试验的抗病效果有了一定的差异,这可能与复杂多变的自然环境的影响有关,导致拮抗菌在油菜植株体内的定殖能力受到影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 油菜菌核病的概述
• 1.1.1 危害症状
• 1.1.2 病原及其病害循环
• 1.1.3 防治措施
• 1.2 生防菌的定殖研究概况
• 1.3 研究目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 油菜菌核病生防菌的分离与筛选
• 2.1.1 供试材料
• 2.1.2 试验方案与方法
• 2.2 油菜菌核病生防菌的鉴定
• 2.2.1 培养性状
• 2.2.2 形态鉴定
• 2.3 绿色木霉菌株控制核盘菌作用的研究
• 2.3.1 绿色木霉发酵液的获得
• 2.3.2 无菌滤液制备
• 2.3.3 抑制菌丝生长
• 2.3.4 抑制菌核萌发
• 2.3.5 抑制菌核形成
• 2.3.6 抑制子囊孢子萌发
• 2.4 绿色木霉菌株的标记与定殖
• 2.4.1 绿色木霉菌抗药性标记
• 2.4.2 绿色木霉菌定殖能力测定
• 2.4.3 再分离绿色木霉菌株与出发原始菌株对核盘菌拮抗性的比较
• 2.5 绿色木霉对植株的促生作用
• 2.5.1 油菜种子内生菌的消除
• 2.5.2 绿色木霉对植株生长的影响
• 2.6 室内盆栽实验
• 2.6.1 接种体制备
• 2.6.2 盆栽实验
• 2.7 田间实验
• 3 结果与分析
• 3.1 油菜菌核病生防菌的分离与筛选
• 3.1.1 供试材料根际土壤及内生真菌的分离
• 3.1.2 供试材料根际土壤及内生真菌的筛选
• 3.2 木霉生防菌的鉴定
• 3.3 绿色木霉菌菌株控制核盘菌作用的研究
• 3.3.1 抑制菌丝生长
• 3.3.2 抑制菌核萌发
• 3.3.3 抑制菌核形成
• 3.3.4 抑制子囊孢子萌发
• 3.4 绿色木霉菌株的标记与定殖
• 3.4.1 绿色木霉菌株的抗药性标记
• 3.4.2 绿色木霉菌株的定殖
• 3.4.3 绿色木霉菌株对核盘菌的拮抗活性
• 3.5 绿色木霉对油菜植株生长的影响
• 3.6 室内盆栽试验
• 3.7 田间试验
• 3.7.1 油菜菌核病病情严重度田间调查
• 3.7.2 油菜菌核病病情严重度统计
• 4 结论与讨论
• 4.1 油菜菌核病生防菌的分离与筛选
• 4.2 油菜菌核病生防菌的鉴定
• 4.3 绿色木霉菌株控制核盘菌作用的研究
• 4.4 绿色木霉菌株的标记与定殖
• 4.4.1 绿色木霉菌株的抗药性标记
• 4.4.2 绿色木霉在油菜根际土及油菜体内的定殖
• 4.4.3 绿色木霉对核盘菌的拮抗活性
• 4.5 绿色木霉菌对植株生长的影响
• 4.6 室内盆栽试验
• 4.7 田间试验
• 参考文献
• 致谢