O型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白疫苗的功能研究

2020-11-23阅读(193)

论文摘要

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，FMD）是一种高度传染性的动物疾病，主要发生于牛、羊、猪等偶蹄类畜牧动物。口蹄疫的病原体是口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）。FMDV的衣壳蛋白VP1是其最主要的抗原蛋白，VP1刺激机体产生的抗体具有中和FMDV的作用。在本实验室前期工作的基础上，从应用的佐剂、免疫途径和疫苗的剂量三个角度对O型FMDV VP1表位重组蛋白（重组VP1epi）的免疫效果进行了系统的研究。研究的结果表明：206油佐剂可以明显增强重组VP1epi的免疫原性；与其它免疫途径相比，经肌肉注射应用的重组VP1epi可刺激豚鼠产生高滴度的FMDV的特异性抗体；200μg是刺激豚鼠产生高水平抗体的重组VP1epi的适宜剂量；重组VP1epi诱生的IgG抗体可以有效地中和O型FMDV。研究的结果还表明：以重组VP1epi包被作ELISA可以有效地检测由FMDV诱生的特异性抗体。此外，也观察了含重组VP1epi包涵体免疫效果。本文的结果提示，我们研制的O型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白疫苗可能成为一种新型的O型口蹄疫预防疫苗。

论文目录

目录

前言

文献回顾

一、概述

二、口蹄疫病毒（FMDV）研究简介

1 FMDV基因组的结构和功能

1.1 FMDV RNA 5'UTR

1.2 FMDV RNA 3'UTR

1.3 FMDV基因组RNA的蛋白编码区

2 FMDV的结构蛋白及其功能

三、口蹄疫的流行病学研究

四、口蹄疫疫苗的研究进展

1 传统疫苗

2 基因工程亚单位疫苗

3 合成肽疫苗

4 Conjugate疫苗

5 基因缺失疫苗

6 转基因植物疫苗

7 病毒载体疫苗

8 核酸疫苗

材料和方法

1、主要试剂、材料和仪器

1.1 主要试剂

1.2 质粒与菌株

1.3 培养基

1.4 实验动物、细胞、病毒及其它

1.5 主要仪器设备

2、主要方法

2.1 pET28a-VP1epi重组质粒的构建和表达

2.2 鉴定重组VP1epi是否以包涵体形式表达

2.3 SDS-PAGE电泳

2.4 重组VP1epi包涵体的提取

2.5 以Western blot方法鉴定重组VP1epi

2.6 重组VP1epi的纯化

2.7 重组VP1epi免疫豚鼠的体内试验

2.8 重组VP1epi包涵体免疫豚鼠的体内试验

2.9 ELISA检测重组VP1epi免疫的豚鼠血清

2.10 重组VP1epi免疫豚鼠血清的细胞病毒中和试验

实验结果

第一部分重组VP1epi包涵体的免疫效果检测

1.1 重组VP1epi包涵体的提纯

1.2 重组VP1epi包涵体的Western blot鉴定

1.3 重组VP1epi包涵体免疫豚鼠的体内试验

1.4 重组VP1epi包涵体免疫豚鼠血清的ELISA检测

第二部分重组VP1epi的纯化和鉴定

2.1 重组VP1epi的纯化

2.2 重组VP1epi的Western blot方法鉴定

第三部分重组VP1epi的免疫学功能的研究

3.1 重组VP1epi对FMDV特异性抗体的诱生作用

3.2 重组VP1epi对VP1epi特异性抗体的诱生作用

3.3 重组VP1epi对O型FMDV中和抗体的诱生作用

图和照片

讨论

1、口蹄疫重组蛋白疫苗的分子结构设计

2、关于重组VP1epi包涵体的讨论

3、重组VP1epi免疫功能试验问题的讨论

4、关于重组VP1epi在豚鼠体内实验的问题

5、关于细胞病毒中和试验

6、间接ELISA检测结果与病毒中和试验结果的相关性

7、下一步实验的设想

结论

参考文献

攻读博士学位期间发表的学术论文和其它成果

中文摘要

一、本研究的概要

二、本研究的结果概述

1 重组VP1epi包涵体的免疫效果检测

1.1 重组VP1epi包涵体的提纯

1.2 重组VP1epi包涵体的Western blot鉴定

1.3 重组VP1epi包涵体免疫豚鼠的体内试验

1.4 重组VP1epi包涵体免疫豚鼠血清的ELISA检测

2 重组VP1epi的纯化和鉴定

2.1 重组VP1epi的纯化

2.2 重组VP1epi的Western blot方法鉴定

3 重组VP1epi的免疫学功能的研究

3.1 重组VP1epi对FMDV特异性抗体的诱生作用

3.2 重组VP1epi对VP1epi特异性抗体的诱生作用

3.3 重组VP1epi对O型FMDV中和抗体的诱生作用

三、小结

Abstract

致谢

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