论文摘要
为了研究甲状旁腺素（PTH）和钙在促进骨形成中的协同作用,分别以PTH纯合子(PTH-/-)雄鼠与PTH杂合子(PTH+/-)雌鼠交配或以PTH+/-雄鼠与PTH-/-雌鼠交配而获得PTH+/-和PTH-/-子代小鼠,并利用正常饮食（1.0%钙、0.6%磷）或高钙饮食（2.0%钙、0.4%磷）喂养PTH+/-。和PTH-/-母鼠,观察PTH缺乏和高钙饮食致母乳成份改变及其对3周龄子代PTH+/-和PTH-/-。小鼠骨形成的影响。结果发现PTH基因敲除使哺乳期乳汁中钙浓度和1,25（OH）2D3水平降低,但使乳汁中PTH相关肽（PTHrP）水平升高。与正常饮食母鼠相比,高钙饮食的PTH+/-或PTH-/-母鼠乳汁中钙浓度升高,1,25（OH）2D3和PTHrP水平则降低。正常饮食母鼠哺乳的PTH-/-子代小鼠血清钙降低,血清磷升高。然而,高钙饮食母鼠哺乳的PTH-/-子代小鼠的低钙血症和高磷血症得以纠正。与正常饮食母鼠哺乳的子代小鼠相比,高钙饮食母鼠哺乳的PTH+/-和PTH-/-子代小鼠血清1,25（OH）2D3水平显著下降。与同一母鼠哺乳的PTH+/-子代小鼠相比,PTH-/-子代小鼠骨密度、骨小梁容量和成骨细胞数都明显下降;无论母鼠喂以正常饮食还是高钙饮食,与PTH+/-母鼠哺乳的子代小鼠相比,PTH-/-母鼠哺乳的子代小鼠的骨密度、骨小梁容量和成骨细胞数都明显下降;与正常饮食母鼠哺乳的子代小鼠相比,无论母鼠和子鼠的基因型是PTH+/-还是PTH-/-,高钙饮食母鼠哺乳的子代小鼠的骨密度、骨小梁容量和成骨细胞数都明显增加,而破骨细胞数则明显减少。骨形成指标在高钙饮食喂养的PTH+/-母鼠哺乳的PTH+/-子代小鼠最高,而在正常饮食喂养的PTH-/-母鼠哺乳的PTH-/-子代小鼠最低。这些结果说明PTH缺乏能够明显地降低成骨细胞骨形成,而这种降低不能完全被饮食钙所纠正。PTH缺乏和高钙饮食引起母乳成份的改变明显地影响子代小鼠的骨骼发育。母乳中的钙,而不是母乳中的1,25（OH）2D3和PTHrP水平,在影响子代小鼠的骨骼发育中起有至关重要的作用。因此,我们得到的结论是PTH和钙各自具有促进骨形成作用,而且两者在促进成骨细胞骨形成中具有协同作用。为了进一步阐明PTH和钙在促进成骨细胞骨形成中协同作用的可能机理,利用正常饮食或高钙饮食喂养PTH+/-CaSR+/-小鼠并进行雌雄交配,分别获得正常饮食或高钙饮食PTH+/-CaSR+/-母鼠哺乳的WT、PTH-/-和PTH-/-CaSR-/-子代小鼠。通过组织形态学分析和real timeRT-PCR比较分析了3周龄PTH-/-CaSR-/-子代小鼠与同窝WT和PTH-/-子代小鼠的表型差异。结果发现:无论是正常饮食还是高钙饮食母鼠哺乳,PTH-/-子鼠小梁骨容量和成骨细胞数均较WT小鼠明显减低,而PTH-/-CaSR-/-。子鼠小梁骨容量和成骨细胞数不仅较W T子鼠明显减低,而且也较PTH-/-子鼠进一步减低。与正常饮食母鼠哺乳的子鼠相比,高钙饮食母鼠哺乳的W T和PTH-/-子鼠小梁骨容量和成骨细胞数均明显增加,而高钙饮食母鼠哺乳的PTH-/-CaSR-/-小鼠小梁骨容量和成骨细胞数则没有增加。I型胶原real time RT-PCR结果的变化与成骨细胞的变化一致。因此,我们认为CaSR不仅能介导高钙饮食促进骨形成的作用,而且也能介导PTH促进骨形成的作用。。本研究结果提示在怀孕和哺乳期饮食补充适当比例的钙/磷,有利于促进儿童的骨骼发育和生长,并为联合使用PTH和钙磷制剂治疗骨质疏松症提供了实验和理论依据。