农杆菌介导的pac1基因转化大豆的研究

论文摘要

本论文对大豆子叶节经器官发生途径诱导丛生芽的几个重要影响因素进行了研究,同时对与农杆菌介导转化大豆频率有关的影响因子进行了优化,提高了转化频率。本试验筛选了几个高感大豆病毒病而再生能力较强的品种作为受体品种,分别从种子消毒方法、芽诱导培养基、侵染菌液以及根的诱导几方面对转化体系进行了优化。结果表明,用酒精+升汞再用无菌水冲洗的消毒方法较好;而MSB培养基中附加2mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA对丛生芽有很好的诱导效果;用液体YEB重悬活化菌体后侵染效果较好;采用后筛选的方法效果优于普通筛选方法;而将MSB培养基蔗糖减半后加入2mg/L IBA和0.2mg/L 6-BA能够很好的诱导生根。本试验首次采用农杆菌介导法将pac1导入其他性状良好但高感病毒病的大豆品种,共获得了8株PCR检测呈阳性植株,经Southern Blot检测结果显示pac1基因已整合到大豆基因组中。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1 大豆遗传转化研究
• 1.1 用于大豆遗传转化的再生系统
• 1.2 大豆的遗传转化方法
• 2 大豆转基因的应用研究
• 2.1 抗病虫害应用研究
• 2.2 大豆品质改良研究
• 2.3 抗除草剂的应用
• 2.3 其它方面的应用
• 3 大豆转基因研究发展方向
• 3.1 建立高效的大豆转基因受体系统
• 3.2 转基因方法的优化和创新
• 3.3 目的基因的选择
• 3.4 筛选标记基因的改造
• 3.5 外源基因表达的稳定性
• 4 植物抗病毒基因工程研究
• 4.1 植物抗病毒基因工程策略
• 4.2 植物抗病毒基因工程展望
• 5 本论文研究的目的与意义
• 第二章 大豆子叶节转化再生系统的优化
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同大豆种子消毒方法的比较
• 2.2 不同激素种类浓度配比对大豆丛生芽诱导效果的影响
• 2.3 菌液浓度、重悬方式与侵染时间对子叶节遗传转化的影响
• 2.4 不同大豆品种丛生芽诱导率的比较
• 2.5 抗性芽筛选方法的优化
• 2.6 生根培养基的优化
• 3 结论
• 第三章 将pac1基因导入大豆的研究
• 1 农杆菌介导法将pac1基因导入大豆
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 2 转基因植株的分子检测
• 2.1 PCR检测
• 2.2 Southern Blot检测
• 3 结果与分析
• 4 讨论
• 参考文献
• 图版
• 致谢
• 作者简介