慢性心力衰竭大鼠心肌组织中TGF-β1和CTGF的动态表达

论文摘要

慢性心力衰竭（chronic heart failure, CHF）为各种心脏疾病的终末期表现,是导致心脏病患者死亡重要原因。近年来,随着我国高血压病和冠心病发病率的持续上升,CHF的发病率随之上升,己成为严重威胁人们健康的重要疾病。心肌纤维化是CHF的重要病理基础,因此防治心肌纤维化已成为近年来研究的热点。在心肌纤维化的发生和发展过程中,一系列促炎因子发挥着重要的作用,其中转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）和结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）近年来引起了人们的关注,本研究采用肾上腹主动脉缩窄术建立CHF心肌纤维化模型,探讨TGF-β1和CTGF在心肌纤维化发生、发展过程中的作用。目的：采用肾上腹主动脉缩窄方法建立CHF心肌纤维化的动物模型。采用免疫组织化学染色、RT-PCR方法,从细胞水平和分子水平观察TGF-β1和CTGF在压力负荷型心力衰竭大鼠心肌组织中的动态表达,探讨TGF-β1和CTGF与心肌纤维化发生、发展的关系。方法：1清洁级雄性Wistar大鼠42只,随机抽取8只作为假手术组,其余大鼠全部采用肾上腹主动脉缩窄术制作CHF模型。以左室舒张末压（left ventricular end diastolic pressure,LVEDP）≥15mmHg作为成模标准。待模型建立成功后,将剩余大鼠随机分为3组,即心衰1d、心衰7d、心衰14d组,每组8只。假手术组只做分离不做结扎。2各组大鼠到达观察终点时,采用多导电生理记录仪检测血流动力学参数LVEDP及左室内压上升、下降最大速率（left ventricular pressure rise and fall,±dp/dtmax）,取左心室并计算左心室质量指数（the left ventricular mass index,LVMI）。3采用苏木素-伊红（HE）染色和Masson染色法观察各组大鼠左心室心肌组织病理学改变,并检测左心室心肌胶原容积分数（collagenvolume fraction,CVF）。4采用透射电镜观察各组大鼠左心室心肌组织超微结构。5采用SP免疫组织化学染色法检测各组大鼠左心室心肌组织TGF-β1和CTGF蛋白的表达。6采用RT-PCR法检测各组大鼠左心室心肌组织TGF-β1和CTGF mRNA的表达。结果：1各组大鼠血流动力学参数：心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠LVEDP分别为（15.56±1.69）mmHg、（17.87±2.19）mmHg和（20.03±1.93）mmHg,明显高于假手术组（P<0.01）。心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠±dp/dtmax分别为（4673.62±206.63）mmHg/s,（3339.74±238.65）mmHg/s；（4360.26±239.65）mmHg/s,（3091.85±245.24）mmHg/s和（4120.59±215.13）mnHg/s,（2860.20±199.73）mnHg/s,与假手术组大鼠比较明显降低（P<0.01）,并且随着心衰时间的延长,大鼠心功能逐渐恶化。2各组大鼠左心室心肌组织病理学改变HE染色：假手术组大鼠心肌细胞排列整齐,形态正常,细胞质纹理清晰；心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠随着心衰时间的延长,逐渐出现心肌细胞肥大,心肌纤维排列紊乱,呈现波浪状,甚至断裂。Masson染色：假手术组大鼠心肌无明显胶原沉积,心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠随着心衰时间的延长,心肌胶原沉积逐渐增多。3各组大鼠LVMI和CVF：心衰1d组、心衰7d组、心衰14d组大鼠LVMI（?）CVF分别为（2.53±0.17）‰,（15.62±1.83）%；（2.86±0.28）‰,（22.31±2.34）%；（3.15±0.26）‰,（25.12±2.96）%。与假手术组大鼠比较明显升高（P<0.01）,且随着心衰时间的延长逐渐升高。4各组大鼠左心室心肌细胞超微结构观察假手术组大鼠心肌肌原纤维排列整齐,Z带清晰可见,线粒体结构清晰完整,无肿胀及空泡样变,心肌间质极少有胶原纤维沉积。心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠心肌组织逐渐出现肌原纤维排列紊乱,肌节错位,Z带部分消失。线粒体肿胀、嵴不同程度溶解断裂,心肌间质有较多的胶原纤维沉积。5各组大鼠左心室心肌组织TGF-β1的表达TGF-β1蛋白免疫阳性产物呈棕黄色颗粒状,位于心肌细胞的细胞膜和细胞间质,以细胞间质为主。与假手术组大鼠比较,心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠心肌组织TGF-β1蛋白及mRNA的表达均明显升高（P<0.01）,且随着心衰时间的延长,表达逐渐增强,心衰各组间比较有明显差异（P<0.01,P<0.05）。6各组大鼠左心室心肌组织CTGF的表达CTGF蛋白免疫阳性产物呈棕黄色颗粒状,位于心肌细胞的细胞质和细胞间质,以细胞质为主。与假手术组大鼠比较,心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠心肌组织CTGF蛋白及mRNA的表达均明显升高（P<0.01,P<0.05）,且随着心衰时间的延长,表达逐渐增强,心衰各组间比较有明显差异（P<0.01）。结论：1通过肾上腹主动脉缩窄术可成功复制CHF心肌纤维化的模型,并且与人类心肌纤维化病理过程相似。2CHF大鼠心肌纤维化时,心肌组织中TGF-β1和CTGF表达上调,并且其水平的高低与心力衰竭的严重程度密切相关。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
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• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
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