论文摘要
目的:本研究旨在利用分子生物学和细胞生物学方法初步探讨14-3-3β基因在卡波氏肉瘤（Kaposi’s Sarcoma, KS）发生发展中的作用以及在KS发病中的可能机制。方法:收集21例新疆KS患者肿瘤组织、瘤旁正常皮肤组织样本以及12例非KS患者的正常皮肤组织样本作为对照,分别采用Real-time PCR和免疫组化技术,从mRNA和蛋白水平检测样本中14-3-3β表达情况;利用基因重组技术构建14-3-3β真核表达载体,通过脂质体分别转染人脐静脉内皮细胞（ECV-304）与BC-3细胞,用western-blot鉴定转染48小时后含外源性14-3-3β的细胞株,并观察细胞的形态结构,用Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒检测转染后细胞的增殖率等生物学特征变化;应用免疫组织化学Envision二步法和原位细胞凋亡标记技术（TUNEL）对KS患者肿瘤组织及正常皮肤组织进行细胞增殖指数（proliferation index ,PI）及细胞凋亡指数（apoptotic index ,AI）的检测。结果:（1）7例KS患者肿瘤组织中14-3-3β基因的mRNA表达值为3.60±2.62×10-1,最低值为0.78×10-1,最高值为6.83×10-1; 7例KS患者正常皮肤组织中的mRNA表达值为0.95±0.50×10-1,最低值为0.22×10-1,最高值为1.82×10-1。经配对t检验,KS肿瘤组织中14-3-3β的mRNA表达高于自身对照的正常皮肤组织,差异有统计学意义（t=2.554, P<0.05）。（2）14-3-3β蛋白在KS组织中的阳性表达率显著高于在正常皮肤组织中的表达（x2 =18.958,P<0.01）,其阳性反应程度在两组比较差异有统计学意义（t =15.136,P<0.01）。（3）成功构建了14-3-3β基因的真核表达载体,将构建的重组体分别转染人脐静脉内皮细胞ECV-304和BC-3细胞48h后,均有不同程度外源性14-3-3β蛋白的表达,增殖率检测结果显示转染10μg/μl, 20μg/μl, 40μg/μl, 80μg/μl重组体后,ECV-304细胞增殖率分别为19.22±19.90%、36.44±17.84%、41.51±32.52%、46.36±19.89; BC-3细胞增殖率分别为42.58±24.27%、47.26±26.99%、51.35±13.63%、81.83±20.37%,与阴性对照组及未转染组比较,均有显著性差异（p<0.05）。（4）KS组织中PI和AI均明显高于正常皮肤组织（t =6.914、3.183,P<0. 01）;KS组织中14-3-3β蛋白与PI呈正相关（r=0.671, P< 0. 01）,与AI呈正相关（ r=0. 649 , P<0.05）。结论:（1）14-3-3β基因在KS组织中mRNA和蛋白表达水平均增高;（2）14-3-3β基因过表达与KS肿瘤细胞的恶性增殖有关;（3）14-3-3β基因在HHV-8感染的细胞中对肿瘤细胞的促增殖作用更显著;（4）14-3-3β基因与KS的发生发展相关,对KS肿瘤细胞的增殖、凋亡均有促进作用。