重组人干扰素α-2b干粉吸入剂的设计与评价

论文题目: 重组人干扰素α-2b干粉吸入剂的设计与评价

论文类型: 博士论文

论文专业: 药剂学

作者: 江荣高

导师: 潘卫三,王春龙

关键词: 干扰素,稳定性,吸入粉雾剂,表面能,圆二色谱,表面分析,药物动力学,药效学,寡腺苷酸合成酶,聚合酶链反应

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 重组人干扰素α-2b(IFN α-2b)作为一种内源性细胞因子，具有抗病毒、抑制增殖和免疫调节等多种作用。本文对IFN α-2b粉雾剂做了比较全面和深入的研究，以寻求一种发挥全身疗效的非注射给药途径。研究重点主要集中于该蛋白质的稳定性、粉雾剂的分散性和IFN α-2b在人体内的药物动力学及药效学，具体内容可分为以下5个部分： 1、家兔气管内滴入考察干扰素在肺部吸收情况：干扰素经静脉注射、皮下注射以及气管内滴入三种途径给药，并且考察了气管内滴入时牛胆酸钠和柠檬酸等吸收促进剂对肺部吸收的影响。结果表明，在没有吸收促进剂的情况下干扰素从肺部吸收很少，与皮下注射相比其相对生物利用度远低于1％。柠檬酸和牛胆酸钠作为吸收促进剂将血清内干扰素浓度提高了30～50倍。尽管干扰素经肺部吸收的生物利用度很低，但是试验结果表明，干扰素经非注射给药途径吸收入血是可行的。 2、考察了干扰素在旋转蒸发干燥和喷雾干燥过程中的稳定性： (1)用旋转减压蒸发方法考察了缓冲体系、pH值、温度和添加剂对干扰素活性的影响。以柠檬酸—磷酸氢二钠为缓冲体系、调节pH值到7.0左右利于干扰素的稳定性。考察了多种添加剂的稳定作用，结果表明卡波谱934、羟丙基甲基纤维素(HPMC，20000cp)、赖氨酸、蛋氨酸、聚乙烯吡咯烷酮(K30)、硫酸镁、卵磷脂、聚乙二醇-6000、吐温—20／80、2—羟丙基—β—环糊精(HP-β-CD)、聚乙烯醇、十二烷基硫酸钠(SDS)等添加剂对干扰素在旋转减压蒸发过程中的稳定性均有较好的保护作用。 (2)喷雾干燥过程中，雾化气体流量越小以及进口温度越低则干扰素的活性越是能够得到保护。HP-β-CD、SDS、赖氨酸、HPMC(20000cp)、卵磷脂和吐温80／20都能够将喷雾干燥过程中干扰素的活性保持在90％以上。 (3)加入各种活性保护剂后，喷雾干燥粉末多为内部中空的、规则的球体，堆密度在0.2到0.7 g／cm~3之间。但是各个处方所得颗粒表面的光滑程度不尽相同，以HPMC为保护剂制得的产品颗粒形状极不规则，表面有许多皱褶和深度凹坑。 (4)鉴于喷雾干燥粉末具有很强的吸湿性，筛选了一些抑湿剂。其中甘露醇、亮氨酸和氨基乙酸具有较好的抑制喷雾干燥粉末吸收水分的作用。

论文目录:

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前言

第一章干扰素α-2b经家兔肺部的吸收的初步研究

1 干扰素分析方法的确定

2 仪器与试药

3 干扰素α-2b经注射与气管内滴入途径给药的比较

3.1 给药方案及血样采集

3.2 结果与讨论

4 吸收促进剂对干扰素α-2b经肺吸收的影响

4.1 给药方案及血样采集

4.2 结果与讨论

5 本章小结

参考文献

第二章干扰素α-2b的稳定性研究及粉雾剂的制备

1 提高干扰素的稳定性

1.1 旋转减压蒸发法

1.1.1 仪器与试药

1.1.2 实验方法

1.1.3 结果与讨论

1.1.3.1 不同缓冲体系及pH对活性的影响

1.1.3.2 温度对干扰素活性的影响

1.1.3.3 添加剂对干扰素活性的影响

1.2 喷雾干燥法

1.2.1 仪器与试药

1.2.2 实验方法

1.2.3 结果与讨论

1.2.3.1 雾化对活性的影响

1.2.3.2 进口温度对活性的影响

1.2.3.3 添加剂对活性的影响

2 喷雾干燥粉末的形态

3 抑制产品的吸湿性

3.1 抑湿剂的选择

3.2 喷雾干燥条件的影响

4 干扰素粉雾剂的体外沉积

5 本章小结

参考文献

第三章干扰素α-2b粉雾剂体外沉积性能的改善

1 利用喷雾冷冻干燥法制备干扰素粉雾剂

1.1 仪器与试药

1.2 喷雾冷冻干燥法制备可吸入细粉

1.2.1 喷雾冷冻干燥

1.2.2 基本粉体学性质的测定

1.2.3 干扰素α-2b粉雾剂的体外沉积实验

1.3 结果与讨论

1.3.1 喷雾冷冻干燥对颗粒形态的影响

1.3.2 喷雾冷冻干燥粉末粉体学的影响

1.3.3 喷雾冷冻干燥样品的体外沉积

1.4 干扰素在喷雾冷冻干燥过程中的稳定性

1.4.1 干扰素浓度对雾化稳定性的影响

1.4.2 喷入液氮冻结及冻融过程的影响

2 分散性助剂—亮氨酸对干扰素粉雾剂沉积性能的影响

2.1 仪器与试药

2.2 实验方法

2.2.1 喷雾干燥法制备可吸入细粉颗粒

2.2.2 一些基本的粉体学性质

2.2.3 囊壳内残留

2.3 结果与讨论

2.3.1 亮氨酸的加入对喷雾干燥粉末形态的影响

2.3.2 亮氨酸及其用量对喷雾干燥粉末粉体学的影响

2.3.3 亮氨酸的加入对干扰素粉雾剂体外沉积的影响

2.4 分体内聚力的测定

2.4.1 测定装置与操作

2.4.2 结果与讨论

3 乳糖载体对粉雾剂沉积性能的影响

3.1 载体粒径和用量

3.2 乳糖载体的表面修饰

3.2.1 仪器与试药

3.2.2 实验方法

3.2.2.1 乳糖颗粒的表面修饰

3.2.2.2 粒径的测定以及表面形态

3.2.2.3 流动性的测定

3.2.2.4 吸湿试验

3.2.2.5 GC法测定表面能和比表面积

3.2.3 结果与讨论

3.2.3.1 表面修饰对乳糖颗粒的形态的影响

3.2.3.2 表面修饰对流动性和吸湿性的影响

3.2.3.4 表面修饰对粉雾剂沉积性能的影响

3.2.4 结论

3.3 利用重结晶法制备乳糖载体

3.3.1 乳糖重结晶方法

3.3.2 载体颗粒形态的测定

3.3.3 载体的流动性、表面能等性质的测定

3.3.4 结果与讨论

3.3.4.1 重结晶对乳糖颗粒形态的影响

3.3.4.2 重结晶乳糖对粉雾剂沉积性能的影响

4 第三组分的加入

4.1 含第三组分载体的制备

4.2 CⅢ对载体流动性的影响

4.3 CⅢ对载体内聚力的影响

4.4 CⅢ对体外沉积和囊壳内残留的影响

5 本章小结

参考文献

第四章处方及工艺对干扰素α-2b活性影响的机理研究

1 仪器与试剂

2 有关干扰素聚集体的研究

2.1 样品的制备

2.2 试验结果

3 表面分析

3.1 测定条件

3.2 测定结果与讨论

4 用圆二色光谱分析干扰素构象变化

4.1 样品的制备

4.2 结果与讨论

5 讨论

6 本章小结

参考文献

第五章干扰素α-2b粉雾剂的体内研究

1 体内受试制剂的选择及其给药方法

2 给药方案与血样采集

3 用药后的副反应

4 药代动力学研究方法与结果

4.1 仪器与试药

4.2 标准曲线的制备

4.3 日间精密度

4.4 血药浓度测定结果与讨论

5 药效学研究方法与结果

5.1 材料与仪器

5.2 2-5 OAS两种亚型mRNA的RT-PCR分析

5.2.1 2-5 OAS两种亚型及其测定方法的确定

5.2.2 mRNA引物的确定

5.2.3 细胞的分离与裂解确定

5.2.4 总RNA的提取

5.2.5 RT反应生成互补DNA

5.2.6 PCR扩增

5.2.7 电泳分析

5.2.8 成像与分析

5.3 结果与分析

5.4 讨论

5.4.1 内参的选定

5.4.2 引物的设计

5.4.3 关于RNA的提取

5.4.4 PCR循环次数的确定

5.4.5 关于测定值的处理补充

5.4.6 OAS1、OAS2与干扰素疗效的关系

5.4.7 对干扰带的说明

5.4.8 对测定结果的讨论

6 本章小结

参考文献

全文结论

致谢

作者简介

攻读博士学位期间发表论文情况

发布时间: 2006-11-27

参考文献

[1].肿瘤新生血管内皮细胞导向性人干扰素α2a的研制[D]. 孟洁如.第四军医大学2005
[2].重组人干扰素α-2b直肠栓的制备及其在猕猴体内生物利用度研究[D]. 段明华.吉林大学2010
[3].重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白抗乙肝病毒的药效学及部分机制[D]. 徐丙发.安徽医科大学2009

重组人干扰素α-2b干粉吸入剂的设计与评价

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