论文摘要
病毒性肝炎及其相关的肝硬化,在我国发病率高、危害严重,严重威胁着人民群众的身体健康,并给病人带来了沉重的经济负担,但目前还没有确切有效的治疗手段。无论是慢性病毒性肝炎,还是肝硬化,都存在不同程度的肝细胞损伤,在病毒性肝炎的综合治疗方案中,促进肝细胞再生占有重要的地位,特别是对于重型肝病。肝再生增强因子(Augmenter if liver regeneration,ALR)在肝细胞的再生过程中发挥着举足轻重的作用。ALR是新近克隆的蛋白质因子,能特异地刺激肝源细胞的增殖,并在动物模型中对急性肝衰竭和慢性肝病有救治作用。但其作用机制尚不清楚,开展ALR作用机制的研究,将为肝病的治疗提供理论依据和新思路。 目的 (1) 应用抑制性削减杂交技术筛选重组人肝再生增强因子(recombinant human aumenter of liver regeneration,rhALR)反式激活的基因,探讨rhALR刺激肝细胞再生的作用机制;(2) 研究重组人肝再生增强因子(rhALR)对细胞周期蛋白依赖性激酶1(cdk1)基因的反式激活作用。 方法 (1) 应用大肠杆菌系统,表达、纯化重组人肝再生增强因子蛋白。体外刺激HepG2细胞,以溶剂pH7.8的磷酸盐缓冲液为平行对照,制备作用后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并
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标签：重组人肝再生增强因子论文; 细胞周期蛋白依赖性激酶论文; 反式激活论文; 抑制性消减杂交论文;