青枯无致病力菌株控制烟草青枯病的研究

论文摘要

烟草青枯病是烟草生产上一大毁灭性土传病害,病原为青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum E F Smith）。目前防治烟草青枯病的主要方法是化学防治,但还没有一种特效药剂,且化学防治易产生“3R”问题,给环境造成很大的影响。生物防治对环境无污染,越来越受到植物病理学家的青睐。无致病力青枯菌来自植物,与青枯致病菌有相同的进入寄主植物的机制,是青枯病生防材料的重要来源。本研究的目的在于找到对烟草青枯病有较好拮抗性的菌株,并能对其控病机理有初步的了解。将实验室保存的青枯无致病力菌株经平板复壮后用于烟草青枯病的控病试验,并对相对防效较好菌株进行田间小区控病、在烟草植株上的定殖试验,并对其进行了初步的鉴定,得到了以下结果：1、将实验室保存的青枯无致病力菌株进行平板的复壮,并用平板喷雾法测试了出发菌株与复壮菌株对青枯菌的平板抑菌效果,结果显示所用复壮方法-平板划线法可以使部分菌株对青枯菌的平板抑菌效果有所提高,经平板的初筛、复筛后得到15株平板抑菌效果较好菌株；对从烟草典型青枯病植株上分离的菌株进行致病性测定,选取致病性较强菌株FL-9-1为青枯病指示菌株；2、将平板抑菌效果较好的15个菌株用于烟草青枯病的温室盆栽控病试验的初筛,用伤根接种待测菌后7d接种青枯菌,4周后,有6个菌株对烟草青枯病的相对防效>70%,菌株Aujd5-2y、Tbw1-7-3、Aujdl 1-1-4在一定程度上可以推迟烟草青枯病的发病时间,且在4周后的相对防效为89.4%，与其它菌株处理的相对防效差异显著。将初筛相对防效>70%的6个菌株用于温室控病试验复筛,4周后,除菌株Aujdl 1-1-4外,其余5个菌株伤根接种的相对防效大于灌根接种,菌株Aujd5-2)、Tbw 1-7-3的相对防效显著高于其它菌株；3、将菌株Aujd5-2y、Tbw 1-7-3用于烟草青枯病田间小区控病试验,以农用链霉素为药剂对照,发病对照发病1个月后,菌株Aujd5-2y对烟草青枯病的相对防效为35.64%,高于农用链霉素处理的相对防效,且差异显著；4、用硫酸链霉素和利福平对菌株Aujd5-2y进行抗药性标记,并将标记菌株Aujd5-2yk接种到烟草植株上,通过组织印迹法和稀释分离法检测该菌株在烟草根表和体内的定殖及消长情况。结果显示,组织印迹法只能在烟草根表检测到该菌,稀释分离法一定时间后在烟草根、茎、叶内都能检测到该菌,说明该菌株可以在烟草体内和根表定殖和转移,伤根接种较灌根接种在烟草体内同期的数量高,且两种方法处理后标记菌株在烟草体内呈现出先增加后减少的趋势。5、对温室控病复筛的6个菌株和定殖试验中回收菌株进行了初步鉴定,主要包括菌体形态、革兰氏染色、生理生化等。结果显示,温室控病6个菌株除菌株Aujdl l-1-4外,其余5个温室控病复筛菌株与青枯菌培养性状、菌体形态、生理生化性状描述一致,且这5个菌株不能引起烟草出现青枯症状,本研究将这5个菌株初步鉴定为Ralstonia solanacearum的无致病力菌株,定殖试验回收菌株与青枯菌性状一致,该菌为所施抗药性标记菌株。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 烟草青枯病研究概况
• 1.1 烟草青枯病发生特点
• 1.2 烟草青枯病的病原学
• 1.3 烟草青枯菌致病机理
• 2 烟草青枯病生物防治研究进展
• 2.1 无致病力青枯菌的利用
• 2.2 其它生防材料在防治烟草青枯病中的利用
• 3 生防菌研究中常用的标记方法
• 3.1 抗生素抗性标记
• 3.2 免疫学方法
• 3.3 基因标记
• 3.4 DNA和RNA探针法
• 3.5 其他方法
• 引言
• 第二章 待测菌株的复壮与平板拮抗筛选
• 1 材料
• 1.1 供试菌株
• 1.2 供试烟草
• 1.3 培养基
• 1.4 常用试剂
• 1.5 主要仪器
• 2 试验方法
• 2.1 烟苗的培育
• 2.2 青枯致病菌的分离和致病性测定
• 2.3 青枯无致病力菌株的复壮与平板抑菌筛选
• 3 结果与分析
• 3.1 青枯致病菌株的分离和致病性测定
• 3.2 青枯无致病力菌株的复壮与平板抑菌筛选
• 4 讨论
• 第三章 温室和田间小区控病试验
• 1 材料
• 1.1 供试菌株
• 1.2 烟草品种
• 1.3 培养基
• 1.4 参试药剂
• 1.5 主要仪器
• 2 试验方法
• 2.1 烟苗的培育
• 2.2 温室控病筛选
• 2.3 田间小区控病试验
• 3 结果与分析
• 3.1 温室控病试验初筛
• 3.2 温室控病试验复筛
• 3.3 田间小区控病试验
• 4 讨论
• 第四章 抗药性标记和在烟草体内的定殖试验
• 1 材料
• 1.1 供试菌株
• 1.2 烟草品种
• 1.3 培养基
• 1.4 抗生素
• 1.5 常用试剂
• 2 试验方法
• 2.1 抗药性标记
• 2.2 标记菌株的抗药稳定性检测
• 2.3 标记菌株与原始株平板抑菌比较
• 2.4 标记株在植株体内外的定殖与消长
• 2.5 回收菌的抑菌活性检测
• 3 结果与分析
• 3.1 抗药性标记
• 3.2 标记株的抗药稳定性检测
• 3.3 标记株与原始株平板抑菌比较
• 3.4 标记菌株在植株体内外的定殖与消长
• 3.5 回收菌的抑菌活性检测
• 4 讨论
• 第五章 鉴定
• 1 材料
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 所用试剂
• 1.4 主要仪器
• 2 试验方法
• 2.1 培养性状和菌体形态观察
• 2.2 生理生化
• 3 结果与分析
• 3.1 菌落及菌体形态观察
• 3.2 生理生化
• 4 讨论
• 第六章 小结与展望
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 硕士期间发表论文